每支银耳试管一级种一般只能扩接成1瓶二级种；而木屑1瓶二级种可以扩接成40～50瓶二级种。一级种移接扩繁二级种程序与方法如下：
（1）检验一级种质量在扩繁二级种前，检验所用的一级种质量，具体做到“三看”：一看标签是否符合所需要的品种；二看菌丝有否退化或污染杂菌；三看菌丝活力，银耳原基是否正常分泌水珠，耳友菌丝色泽和生长是否正常。菌龄较长的一级种，斜面上原基胶质化萎缩，前端部位菌丝干涸。在冰箱中保存的适期一级种，提前取出置于25℃以下恢复菌丝生长l～2天再使用；若在冰箱中保存期超过3个月的一级种，必须通过转管培养后使用。
（2）无菌操作为了保证扩繁的菌种是纯培养，防止杂菌污染，扩繁必须在空间消毒后的接种箱内进行，在生产性的接种前24小时，按各种空间消毒剂的用量，对接种箱先进行一次空消。在接种前30分钟，当试管一级种或木屑一级种，二级种培养基、接种工具装入箱内后，一级种用牛皮纸包裹或纱布遮盖，按常规，用5％石炭酸溶液喷雾，紫外线灯照射15～20分钟。工作人员洗净手，并更换工作服。
（3）接种方法银耳试管一级种扩接二级种，原则上是1：l接种，即1支试管种接1瓶木屑二级种。若试管内有2个白毛团可接2瓶二级种，也有人把白毛团分割多块，以多接二级种。接种时按无菌操作要求先接入白毛团菌丝，同时挑取试管培养基前端长势良好的羽毛状菌丝接在白毛团旁边，使之拌生。
木屑培养基一级种扩接时，选取一级种l瓶，与经装料灭菌的，按比例连同接种工具一起装入接种箱内40～50瓶二级种培养基，经空间消毒后，按无菌操作进行破瓶，刮除耳基上部的结块和黑点，选取中下部位菌丝体，移入二级种菌瓶中，进行反复搅拌，使两种菌丝混合于料中；然后用接种匙从中提取一小匙的菌种，接入二级种培养基上。也可以在一级种的菌丝块中取米粒大小的菌丝体，接入二级种培养基中央。这种移接的二级种，也可作为一次性木屑一级种使用。
（4）上架培养接种后的二级种，排放上架，瓶距2～3厘米，控温23～25℃培养，菌丝量增多后调低1～2℃，空问相对湿度70％以下，散射光线，定期通风。二级种培养时间取决于一级种的种型和接入菌种量的多少，木屑一级种接种的，培养15～20天；采用试管一级种接种的需要培养25～30天。二级种成熟的标准是菌丝伸展至离瓶底2～3厘米，原基形成碎米状的耳芽或小耳片，伴有棕红色水珠。