神经组织的化学组成比较复杂和特殊。本章简要介绍其组织处理程序和常用的显示神经组织各主要成分的染色方法。
一、尼氏物质焦油紫(Vogt氏)染色法
1.固定10%中性缓冲福尔马林。
2.切片石蜡,6~12微米。
3.试剂
2%焦油紫储存液
坚牢焦油紫2克
蒸馏水100毫升
醋酸钠缓冲液
醋酸钠2克
蒸馏水1000毫升
冰醋酸3毫升
坚牢焦油紫工作液
2%坚牢焦油紫储存液 3毫升
缓冲液100毫升
4.步骤
(1)脱蜡至第二次纯酒精;
(2)纯酒精内2小时;
(3)坚牢焦油紫工作液内40~60分钟;
(4)95%酒精中快速分化;
(5)纯酒精脱水,二甲苯透明各2次,每次2分钟;
(6)树脂封固。
5.结果
尼氏物质深紫色
核紫色
背景无色
二、尼氏物质■花青(Einarson氏)染色法
1.固定10%中性缓冲福尔马林,任克氏(zenkers)液或任克氏液—甲醇混合液。
2.切片石蜡,6微米。
3.试剂
■花青溶液
■花青0.15克
硫酸铬钾(明矾)5克
蒸馏水100毫升
将铬明矾溶于热蒸馏水中,加入■花青并微火煮沸10分钟,冷却并过滤,溶液可保存1周。
4.步骤
(1)脱蜡,至蒸馏水;
(2)■花青液内,56℃烤箱内1小时或室温过夜;
(3)蒸馏水漂洗;
(4)95%酒精和纯酒精各脱水2次,每次2分钟;二甲苯透明2次,每次2分钟;
(5)树脂封固。
5.结果
尼氏物质蓝色
三、尼氏物质改良醛—硫堇PAS染色法
1.固定10%中性缓冲福尔马林。
2.切片石蜡,6微米。
3.试剂
0.5%硫酸水溶液
0.5%高锰酸钾溶液
2%偏亚硫酸氨钾溶液
醛硫堇溶液
硫堇0.5克
70%酒精91.5毫升
三聚乙醛7.5毫升
盐酸1毫升
使用之前装在紧密封闭之容器内3~5天使溶液成熟。
0.5%过碘酸溶液(见第15章)
雪夫氏(sch|ff’s)试剂(见第15章)
1%橘黄G溶液 (见第15章)
5%磷钨酸溶液(见第15章)
1%醋酸溶液(见第15章)
4.步骤
(1)脱蜡至蒸馏水;
(2)放入等量0.5%硫酸水溶液和0.5%高锰酸钾溶液内2分钟;
(3)2%偏亚硫酸氢钾溶液中漂白1分钟;
(4)蒸馏水充分洗;
(5)在加盖并密封的染缸中,在醛硫堇混合液中至少染50分钟;
(6)蒸馏水漂洗;
(7)0.5%过碘酸溶液中氧化5分钟;
(8)蒸馏水漂洗;
(9)新鲜雪夫氏试剂15分钟;
(10)自来水充分洗15分钟;
(11)1%橘黄G溶液内3分钟;
(12)5%磷钨酸溶液内1分钟;
(13)1%醋酸液短暂漂洗;
(14)95%酒精和纯酒精各脱水2次,每次2分钟,二甲苯透明2次,每次2分钟;
(15)树脂封固。
5.结果
尼氏物质蓝色
此染色法为染垂体前叶细胞和胰岛细胞方法之改良法。
四、比尔索夫斯基(Bielschoesky)神经元纤维染色法
1.固定10%中性缓冲福尔马林。
2.切片石蜡,8微米。
3.试剂
20%硝酸银溶液(见第15章)
浓氢氧化铵
1%氢氧化铵 (见第15章)
10%非缓冲福尔马林溶液(见第15章)
浓硝酸
柠檬酸
显色溶液
10%非缓冲福尔马林液20毫升
蒸馏水100毫升
浓硝酸1滴
柠檬酸0.5克
5%硫代硫酸钠溶液 (见第15章)
4.步骤
(1)脱蜡至蒸馏水;
(2)放入预热至37℃的20%硝酸银溶液中;
(3)保持37℃,染15分钟;
(4)将硝酸银溶液倒出,并保存在一烧瓶中;
(5)将切片置于蒸馏水内;
(6)将6.0毫升浓氢氧化铵加入烧瓶内的硝酸银溶液中;
(7)一滴一滴地加入浓氢氧化铵使银液变清亮(此时为黑色),约加入1~3毫升,直至形成的沉淀物消失。加入的氢氧化铵不能超过10毫升,过量的铵会生成沉淀或导致纤维浸染不良;
(8)将此铵银液倒在切片上,在37℃烤箱内染15分钟;
(9)切片置于1%氢氧化铵溶液中1~3分钟;
(10)将铵银液倒回烧瓶,加入10~25滴显色液后,将切片放入3~5分钟;
(11)将切片浸入1%氢氧化铵溶液中以中止银反应,并用显微镜观察切片;
(12)如果纤维着色不够深,将切片浸入1%氢氧化铵溶液中,然后再放入铵银显色液中3分钟;
(13)1%氢氧化铵溶液漂洗3分钟;
(14)将5%硫代硫酸钠溶液倒在切片上,保持5分钟;
(15)蒸馏水漂洗3次,每次5分钟;
(16)95%酒精和纯酒精各脱水2次,每次2分钟,二甲苯透明2次,每次2分钟;
(17)树脂封固。
5.结果
神经元纤维及老年斑 黑色
背景 黄—棕色
五、鲍地安氏(Bodian’s)神经纤维和神经末梢染色法
1.固定10%中性缓冲福尔马林。
2.切片石蜡,8微米。
3.试剂
1%强蛋白银(protelnate Argenate)溶液
强蛋白银 1克
蒸馏水 100毫升
用一酸洗净的容器,按如下方法配制:将强蛋白银喷在水面上,静置至其溶解,临使用时加入6克铜粒(或纯铜片)。
还原液
对苯二酚 0.1克
37%~40%甲醛 5毫升
蒸馏水 100毫升
1%氯化金溶液(见第15章)
2%草酸溶液(见第15章)
5%硫代硫酸钠溶液(见第15章)
苯胺蓝溶液
苯胺蓝 0.1克
草酸 2克
磷钼酸 2克
蒸馏水 300毫升
4.步骤
(1)脱蜡至蒸馏水;
(2)置于新鲜配制的强蛋白银溶液中,37℃静置72小时;
(3)蒸馏水漂洗3次;
(4)置于还原液中10分钟;
(5)蒸馏水漂洗3次;
(6)1%氯化金溶液中着色10分钟;
(7)蒸馏水漂洗3次;
(8)2%草酸溶液显色3~5分钟;
(9)蒸馏水漂洗3次;
(10)5%硫代硫酸钠处理5分钟;
(11)蒸馏水漂洗;
(12)苯胺蓝溶液复染1~5分钟;
(13)95%酒精及纯酒精各脱水2次,每次2分钟;
(14)二甲苯透明2次,每次2分钟;
(15)树脂封固。
5.结果
有髓及无髓神经纤维和神经元纤维 黑色
背景 蓝色
核 黑色
六、福尔摩斯?穴Holmes)神经细胞和神经纤维染色法
1.固定10%中性缓冲福尔马林。
2.切片石蜡,6微米。
3.试剂
20%硝酸银溶液(见第15章)
1%硝酸银溶液 (见第15章)
10%吡啶溶液(见第15章)
0.2%氯化金溶液(见第15章)
2%草酸溶液 (见第15章)
5%硫代硫酸钠溶液 (见第15章)
硼酸缓冲液
硼酸12.4克
蒸馏水1000毫升
硼酸钠缓冲液
四硼酸钠?穴硼砂) 19克
蒸馏水1000毫升
浸染溶液
硼酸缓冲液55毫升
硼酸钠缓冲液45毫升
蒸馏水394毫升
1%硝酸银溶液 1毫升
10%吡啶溶液5毫升
还原溶液
对苯二酚1克
结晶亚硫酸钠10克
蒸馏水100毫升
4.步骤
(1)脱蜡至蒸馏水;
(2)20%硝酸银溶液2小时;
(3)蒸馏水清洗3次,每次3分钟;
(4)置于浸染溶液中,染缸加盖,37℃温箱中过夜;
(5)自温箱中取出染缸,弃去染液,将切片放入一干净染缸中;
(6)自来水轻洗2分钟;
(7)蒸馏水清洗;
(8)氯化金溶液中着色3分钟;
(9)蒸馏水快速清洗;
(10)草酸溶液中显色3~5分钟,显微镜观察下,保持草酸溶液在切片上之湿润状态,直至轴突完全显蓝黑色;
(11)蒸馏水清洗;
(12)硫代硫酸钠溶液中5分钟;
(13)自来水洗5分钟;
(14)95%酒精和纯酒精各脱水2次,每次2分钟;二甲苯透明2次,每次2分钟;
(15)树脂封固。
5.结果
轴突黑色
神经和神经末梢黑色
背景灰—粉红
七、髓磷脂和神经细胞的Luxol坚牢蓝?穴Klnver-Barrera)染色法
1.固定10%中性缓冲福尔马林。
2.切片石蜡,15~20微米。
3.试剂
0.1%Luxol坚牢蓝溶液
Luxot坚牢蓝,MBS0.1克
95%酒精100毫升
将染料溶于酒精,每100毫升溶液中加入0.5毫升10%醋酸。溶液可保持数月稳定状态。
0.1%坚牢焦油紫溶液
坚牢焦油紫0.1克
蒸馏水100毫升
临使用时加入l5滴10%冰醋酸,过滤。
0.05%碳酸锂溶液
碳酸锂0.05克
蒸馏水100毫升
70%酒精
4.步骤
(1)脱蜡至95%酒精;
(2)Luxol坚牢蓝溶液中,56℃烤箱过夜;
(3)95%酒精洗去多余染液;