1%酸性品红水溶液 5毫升
苦味酸饱和水溶液95毫升
4.步骤
(1)脱蜡至蒸馏水;
(2)Welgert氏苏木素工作液染10分钟;
(3)蒸馏水冲洗切片;
(4)Van Gieson液染1~3分钟;
(5)95%酒精、100%酒精脱水,二甲苯透明,各2次,每次2分钟;
(6)中性树脂封固。
5.结果
胶原红色
肌肉黄色
角化上皮黄色
核黑色
六、Manuel氏网状组织染色法
1.固定10%中性缓冲福尔马林。
2.切片石蜡,6微米。
3.溶液
1%硝酸铀溶液 (见第15章)
氨银溶液
硝酸银100克
蒸馏水1000毫升
彻底混匀,去掉10%硝酸银溶液上层70毫升置于旁边,在剩余的930毫升10%硝酸银溶液中加
28%氢氯化铵60毫升
慢慢地把保留的70毫升硝酸银溶液中的50毫升加入。剩下的20毫升逐渐加入直到反应液轻微混浊即停止再加。此液可在冰箱中贮存几个月。
1%福尔马林溶液
5%硫代硫酸钠溶液
核固红溶液
4.步骤
(1)脱蜡至蒸馏水;
(2)在硝酸铀溶液中增敏2分钟;
(3)流水快速浸泡;
(4)氨银溶液中浸染1分钟;
(5)流水冲洗,2~3次快速浸泡,直到不再有白色沉淀出现;
(6)福尔马林溶液中固定1分钟;
(7)流水冲洗;
(8)氯化金溶液调色1分钟;
(9)流水冲洗;
(10)硫代硫酸钠溶液还原1分钟;
(11)流水冲洗;
(12)核固红溶液复染5分钟;
(13)蒸馏水洗3次;
(14)95%酒精、纯酒精及二甲苯脱水透明,各2次,每次2分钟;
(15)中性树脂封固。
5.结果:
网状纤维 黑色
核及背景 红色
七、Snook氏网状纤维染色法
1.固定10%中性缓冲福尔马林。
2.切片石蜡,6微米。
3.试剂
0.25%高锰酸钾溶液
5%草酸
1%硝酸铀溶液
5%硝酸银溶液
10%氢氧化钠溶液
Snook氏氨银溶液
5%硝酸银溶液20毫升
加入
10%氢氯化钠 20滴
振荡同时加浓氨氧化铵溶液,逐滴加入至溶液变澄清及在量筒的底部残留少许颗粒时为止。过滤后立即使用。
1%福尔马林溶液
1%氯化金溶液
5%硫代硫酸钠溶液
核固红溶液
4.步骤
(1)脱蜡至蒸馏水;
(2)高锰酸钾溶液中氧化5分钟;
(3)自来水冲洗;
(4)置于草酸溶液至切片变干净;
(5)自来水冲洗,然后置于蒸馏水中;
(6)硝酸铀染5分钟;
(7)流水冲洗;
(8)氨银溶液中1分钟;
(9)流水漂洗;
(10)l%福尔马林溶液1分钟;
(11)流水冲洗;
(12)置于1%氯化银溶液中至切片变为灰黑色,1分钟;
(13)流水冲洗;
(14)硫代硫酸钠溶液30秒到1分钟;
(15)流水冲洗;
(16)核固红溶液复染5分钟;
(17)蒸馏水洗;
(18)95%酒精、纯酒精及二甲苯脱水透明,各2次,每次2分钟;
(19)中性树脂封固。
5.结果
网状纤维 灰到黑色
背景 粉红到玫瑰色
6.注意事项
(1)每10~12张切片更换一次溶液。
(2)8到18步应该用酸洗过的染缸,每步均用被石蜡覆盖的镊子或Teflon镊子夹持。8~18步,每步每次只处理一张切片。
八、Wilder氏网状纤维染色法
1.固定10%中性缓冲福尔马林。
2.切片石蜡,6微米。
3.溶液
10%磷钼酸溶液
1%硝酸铀溶液
10.2%硝酸银溶液
硝酸银10.2克
蒸馏水100毫升
4.1%氢氧化钠溶液
氢氧化钠3.1克
蒸馏水100毫升
氨银溶液
硝酸银溶液5毫升
逐滴加入浓氢氧化铵至形成的沉淀几乎完全溶解时,加入氢氧化钠溶液5毫升
溶液中沉淀再次出现,再逐滴加入浓氨水至溶液变澄清。加蒸馏水使该溶液体积达50毫升。
还原溶液
蒸馏水50毫升
40%中性福尔马林0.5毫升
1%硝酸铀 1.5毫升
0.2%氯化金溶液(见第15章)
5%硫代硫酸钠溶液(见第15章)
核固红溶液(见第15章)
4.步骤
(1)脱蜡至蒸馏水;
(2)磷钼酸溶液中还原1分钟;
(3)流水充分漂洗至黄色溶液的所有痕迹均消失;
(4)1%硝酸铀溶液1分钟;
(5)蒸馏水漂洗10~20秒;
(6)氨银溶液1分钟;
(7)95%酒精中快速浸一下;
(8)还原溶液中1分钟;
(9)蒸馏水漂洗;
(10)0.2%氯化金溶液中调色1分钟;
(11)蒸馏水漂洗;
(12)硫代硫酸钠溶液1分钟;
(13)水洗;
(14)核固红溶液复染5分钟;
(15)蒸馏水中充分漂洗;
(16)95%酒精、纯酒精及二甲苯脱水透明,各2次,每次2分钟;
(17)树脂封固。
5.结果
网状纤维 黑色
胶原纤维 玫瑰
其他组织成分 红色
6.注意事项
(1)约5~7张切片通过氨银溶液后,该溶液就应更换。
(2)在氯化金中放置过长时间会导致网状纤维的上色过度,以致其在染色的最后呈红色。
九、DNA及RNA甲基绿—哌洛宁染色法
1.固定10%中性缓冲福尔马林或Carnoy氏固定剂。
2.切片石蜡,4微米。
3.试剂
1%甲基绿贮存液
甲基绿 1.0克
蒸馏水 100毫升
?鄢用以下步骤抽提溶液中的杂质——甲基紫。
氯仿抽提法:
(1)把100毫升l%甲基绿贮存液注入一分液漏斗中。然后加入等体积的氯仿,充分混合;
(2)抽提时间可为几个小时或过夜;
(3)弃去底部已变色的氯仿;
(4)重复加入等体积的氯仿直到氯仿变成无色。
一般而言,抽提3次,每次3小时,即可去除1%甲基绿贮存液中的杂质。该溶液此时可用于配制甲基绿—哌洛宁工作液。
1%哌洛宁Gs贮存液
哌洛宁Gs 1克
蒸馏水100毫升
略微加热并不断地搅拌至哌洛宁溶解。
甲基绿—哌洛宁工作液
1%甲基绿溶液(抽提后) 70毫升
1%哌洛宁Gs贮存液30毫升
用l%醋酸钠溶液调pH至4.8。用前放置过夜。不过滤。
1%醋酸钠溶液
醋酸钠1克
蒸馏水100毫升
4.步骤
(1)脱蜡至蒸馏水;
(2)甲基绿—哌洛宁工作液2分钟;
(3)吸水纸吸干切片,晾5分钟;
(4)将每张切片分别在蒸馏水中快速浸1~2次进行分化镜检。如果切片仍然太红再在80%冷酒精(-5℃)中快速分化;
(5)在丙酮中快速浸2或3次以开始脱水;
(6)经过等体积混合的丙酮和二甲苯,进行完全脱水及透明,每步2次,每次1~2分钟;
(7)中性树脂封固。
5.结果
RNA红色
DNA蓝到蓝绿色
十、Luna氏肥大细胞染色法
1.固定10%中性缓冲福尔马林。
2.切片石蜡,6微米。
3.试剂
醛品红溶液(见第15章)
铁苏木素工作液(Welgert氏) (见笫15章)
甲基橙溶液
甲基橙0.25克
95%酒精100毫升
4.步骤
(1)脱蜡水化到95%酒精;
(2)醛品红溶液染30分钟;
(3)95%酒精漂洗;
(4)Weigert氏铁苏木素工作液染1分钟;
(5)流水洗10分钟;
(6)95%酒精漂洗;
(7)甲基橙溶液染5分钟或到背景为淡黄色为止;
(8)95%酒精、纯酒精及二甲苯脱水透明,每步2次,每次2分钟;
(9)树脂封固。
5.结果
肥大细胞紫色
弹力纤维紫色
其他细胞成分蓝色
背景黄色
十一、Luna氏红细胞及嗜酸性细胞颗粒染色法
1.固定10%中性缓冲福尔马林。
2.切片石蜡,6微米。
3.试剂
铁苏木素工作液(见第15章)
1%比布里希猩红溶液(见第15章
苏木素—比布里希猩红溶液
Welgert氏铁苏木素工作液45毫升
比布里希猩红溶液 5毫升
1%酸酒精溶液(见第15章)
0.5%碳酸锂溶液
4.步骤
(1)脱蜡至蒸馏水;
(2)苏木素—比布里希猩红溶液染5分钟;
(3)1%酸酒精中分化,使核的细节显示良好。一般只需在其中浸8下即可;
(4)自来水漂洗;
(5)浸入碳酸锂溶液中至切片变蓝或红细胞变成鲜红色,一般浸5下即可;
(6)流水冲洗2分钟;
(7)95%酒精、纯酒精及二甲苯脱水透明,每步2次,每次2分钟;
(8)树脂封固。
5.结果
嗜酸性颗粒红色
红细胞红色
Charcott Leyden晶体红色
背景蓝色