采毒前，首先要了解所采毒的毒蛛的习性、毒牙、毒腺、毒液来源、毒液含量、仪器设备的使用、采毒方法以及蛛毒质量标准等，要做到心中有数，这样才能得心应手。蛛毒的采集方法主要有以下几种：
（1）咬瓶法。这种方法的特点是容易掌握、操作简单、采毒量大、不伤蜘蛛，而且不需要昂贵的仪器，熟练人员每天可以采集1 000只蜘蛛的毒素。
在提取蛛毒时，先将60毫升棕色磨口瓶、吸管、镊子、烧杯等器具高温消毒备用。操作时戴上帆布手套，以免被虎纹捕鸟蛛咬、抓伤，用长镊子将蜘蛛从饲养桶中夹出，放进直径为80厘米的大盆子中，用筷子撩拨、逗弄，惹其发怒。一人两手各持一根筷子夹住蜘蛛，另一人左手持60毫升磨口瓶，右手迅速用拇指、食指捏住蜘蛛的第二步足与第三步足的交界处，将螯肢端部（螯爪）放进瓶口，使蜘蛛咬住瓶沿内侧，右手稍微用力捏紧，蜘蛛即排出毒液，毒液顺瓶口流入瓶内。用吸管吸几滴蒸馏水冲洗瓶口及螯爪。把提取出来的毒液放入冰壶，及时拿到实验室处理。所得毒液放进冰箱暂存，待后加工，但暂存时间不能超过一个星期，否则毒液会变质、发臭，丧失了生物学活性。
（2）解剖法。该法是先将蜘蛛冷冻处死，然后从毒蛛头胸部眼区前缘与螯基交界处解剖取出毒腺，放入冰箱（冰柜）经冷冻6～12小时后，再进行冰冻干燥，将干燥的毒腺用2～3倍蒸馏水或生理盐水进行匀浆，离心（4℃，2 000转／分，15分钟），取上清液。然后再向沉淀物中加入等体积的蒸馏水或生理盐水，并用60克／升乙酸调至pH值为4．0进行匀浆，再离心，取上清液。如此反复3次，直至上清液中测不出抗菌活性为止。最后将3次上清液合并，所得毒液放进冰箱暂存，待后加工。
也可以用带有气囊的玻璃毛细管探入毒囊中，通过挤压气囊吸取毒液。
（3）软管诱导刺激法。本法采用4～5根长约4厘米，内径为1.5毫米的透明塑料软管捆扎成一束作为诱物。取毒时，按咬皿法用左手将蜘蛛抓起，然后将软管束送入蜘蛛整牙下诱使其将整牙刺咬软管排毒，经多次反复诱使排毒后，立即抽出软管束，用微量注射器收集毒液，再回收到圆形玻璃试管中，所得毒液放进冰箱暂存，待后加工。