（1）培养料进房。在拆堆进房前一天，要在常规一次发酵料料堆表面喷施乐果800倍液和40％甲醛1000倍液，随即用薄膜覆盖料堆，熏闷3～5小时进行灭虫杀菌，然后拆堆进房。培养料进房时，先从最上层开始，逐层往下按面积、大小堆放成条垄形，不要摊开，一间菇房的料一次性尽快进完。进料后，立即关闭门窗，堵严拔气筒，按每100平方米栽培面积用40％甲醛2．5千克，倒入铁锅放在炉上熏蒸密闭24小时。然后打开门窗及拔气筒通风，待药味散尽后即可翻格、播种。
（2）翻格。培养料进房后经过后发酵、降温，即可进行翻格。翻格又叫翻料或铺料，其操作要领是：①由上而下逐层进行翻格，料要翻拌抖松，料中夹杂的粪块、土块、石块等杂物必须拣净剔除，按面积大小均匀摊放。②翻格时要打开门窗进行通风，将培养料中残留的各种有害气体彻底排除，若料内氨味重、臭味大，要用1％～2％的甲醛溶液喷洒，密闭一夜后，再打开门窗并翻格一次。③若培养料偏干，可结合翻料用1％～2％石灰水调节湿度；若料偏湿，可加大通风量，加快多余水分蒸发，或撒入适量的石灰粉，再翻格一次；若料温高，应在夜间或早晨气温低时再进行翻格。④翻格时若培养料的各项指标均已正常，则可按菌床培养所需要的规格进行铺放。铺放时，要使各部位培养料干湿均匀，松紧一致，整平后料层厚度应达15~20厘米。
（3）播种。①翻格后，当料温下降到25℃～28℃，气温呈下降趋势时，即可播种。②用种量为每平方米一瓶麦粒菌种，净重约0．4千克。③播种前，对菌种瓶外壁、掏种钩、装种用具以及操作人员的双手，均要用0．1％的高锰酸钾或其他消毒液清洗。④菌种用多少掏多少，掏出的菌种捣成小块状，但不要捣得过碎，以免破坏菌丝体结构，削弱其生活力。
⑤一般采用翻播加撒播法，具体操作是：先将2／3的菌种均匀撒在料面上，接着用手抓动培养料，使种块翻入或抖入料层内部，使表层料和菌种混匀，菌种下沉深度最深不超过8厘米，然后将剩余的菌种均匀撒在料面上，再用少量培养料撒盖，使种块呈若隐若现状。播种完毕，用手或木板轻轻拍平料面，再用薄膜封严，保湿发菌。此法播种速度快，菌丝封面早，吃料快，杂菌污染少，菌床发菌速度整齐一致，发菌时间缩短，而且节省菌种，但发菌初期要加强菇房保湿。
（4）管理。从播种到覆土之前这段时间的管理重点是抓好菇房的控湿、控温、控光、通风换气以及病虫害防治工作，以促进鸡腿菇菌丝在培养料中尽快萌发定植，并迅速生长。其主要管理措施有：
①控湿。播种后3天内以保湿为主，菇房要紧闭门窗及拔风筒，每天早晚各一次开小窗通风15～30分钟，使室内空气湿度保持在80％～85％，以促进菌丝尽快萌发并在料面迅速生长。若菇房保湿性差，要喷水保湿。3天后，当新生菌丝已经定植生长时，应逐渐加大通风量，以降低料温，使菌丝向料内深入，并抑制杂菌的发生。这时室内的空气湿度可保持在80％左右，并一直保持到发菌结束。
②控温。鸡腿菇菌丝发育的最适宜温度为22℃～26℃，若菇房气温超过28℃，要在早晚开窗通风降温，若气温低于15℃，则需采取升温措施。播种3天后，菌丝的生长会使料温上升，甚至超过室温，这时要把料温控制在24℃～28℃，不能超过30℃，以免烧坏菌丝。整个发菌期间的室温要控制在26℃以下。
③其他措施。整个发菌期间要保持黑暗环境，防止强光照射，并做好病虫害的预防工作。
在适温（22℃～26℃）条件下，播种后18～20天菌丝即可发到料底，可在15~18天时覆土。