常压蒸汽灭菌可用土蒸锅、蒸笼进行。灭菌温度一般为100℃，灭菌时间通常从冒大汽开始计算，一般维持8小时以上，再闷4～6小时出锅。
常压蒸汽灭菌锅的操作规程如下所述：①装锅时菌种瓶摆放不宜太密实，要留出一定的空隙，保证热蒸汽流动通畅；②加足水量，密封锅门，开始时用大火猛烧，尽量在短时间内使锅内温度达到100℃；③当温度达到100℃后，可适当降低火力，使锅内温度保持在98℃~102℃，注意少量多次补水，防止一次加水过多而降低灶内温度；④灭菌时间达到后，停止加热，利用余热再封闭一段时间，灶体内温度降至40℃左右时打开锅门，冷却至自然温度后出锅。