书城医学药理学实验方法
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第73章 溶血与凝聚检查法

一、定义

本法系将一定量供试品与2%的兔血红细胞混悬液混合,温育一定时间后,观察其对红细胞状态是否有产生影响的一种方法。

二、仪器和用具

1ml和5ml的移液管(或移液器)、试管、试管架、恒温水浴箱、带盖三角瓶、玻璃珠、离心机、天平。

三、动物

健康实验用兔,雌、雄均可,雌者需无孕。

四、2%兔血红细胞混悬液的制备

取兔血数毫升,放入含有玻璃珠的三角瓶中振摇lOmin,除去纤维蛋白原,使成为脱纤血液。加入0.9%氯化钠溶液约10倍量,摇匀,1500r/min离心15min,除去上清液,沉淀的红细胞再用0.9%氯化钠溶液按上述方法洗涤2~3次,至上清液不显红色为止。将所得红细胞用0.9%氯化钠溶液配成2%红细胞混悬液,供宴验用。

五、供试品溶液的制备

按《中国药典》品种项下规定的剂量作为供试品溶液。

六、检查法

取洁净试管5支,编号,1、2号管为供试品管,3号管为阴性对照管,4号管为阳性对照管。依次加入2%缸细胞混悬液、0.9%氯化钠溶液或蒸馏水、供试品溶液,混匀后,立即放人37℃的恒温箱中进行温育,3h后观察溶血和凝聚反应(特殊规定除外)。加样方法和加样量如下。

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试管编号1    2    3    4     5

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2%血红细胞混悬液(ml)2.5   2.5   2.5   2.5

0.9%氯化钠溶液(ml)2.2   2.2   2.5        4.7

蒸馏水(ml)2.5

供试品溶液(ml)0.3   0.3             0.3

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七、结果判定

按上述方法检测,当阴性对照管无溶血和凝聚发生,阳性对照管有溶血发生,若供试品管中的溶液在3h内不发生溶血和红细胞凝聚现象,样品的溶血与凝聚检查符合规定;如出现溶血或红细胞凝聚现象,样品的溶血与凝聚检查为不符合规定。

八、注意事项

观察凝聚反应时,首先应观察有无溶血(如有溶血,该溶液上清液显红色),然后将试管封口后倒管3~5次,用肉眼观察溶液中如无黑色状颗粒物,溶液均匀时为无凝聚反应,符合规定;如有黑色状颗粒物,说明样品有凝聚反应,不符合规定。