将灭菌的料袋或料瓶冷却后，移入接种箱或接种室内。接种时，对接种箱和原种瓶先进行消毒处理，然后进行接种操作，把挑选好的原种瓶拔去棉塞，用火焰封锁瓶口，固定在瓶架上或左手持瓶。单人接种时，用左手执菌种瓶，右手拔去封口材料，用火焰灼烧瓶口，用已经过灼烧的接种铲，去除原种瓶内的表层菌皮、老接种块等，然后用接种勺挖取菌种，放入料瓶或料袋内。一般1瓶原种接种40～50瓶栽培种或20袋栽培种。如果是2人接种，一人负责执原种瓶，夹取菌种接种，另一人负责打开料瓶或料袋的封口。接种后，火焰灼烧瓶口，塞上棉塞或塑料膜扎口。接种后轻摇料瓶或料袋，使菌种分散在培养基表面。
