接种是滑菇栽培的关键环节之一。接种所要遵循的原则是：环境清洁、用具消毒、菌种撒匀、包严不漏。接种前应事先布置、处理好接菌室，接菌室应选择清洁、密闭、无污染源的房间，面积有6～8平方米即可。接菌室也可用塑料薄膜和木杆搭制，或用胶合板钉制。接种用具有盆、镊子和螺丝刀、木框等。
接种前先用2％～3％来苏儿水溶液喷雾，再用气雾消毒剂对空间进行熏蒸消毒，半小时后即可接种。如双人接种原种，一人拿原种瓶，拔开原种瓶棉塞，另一人在酒精灯旁火焰旁取下棉塞，并用火焰灼烧灭菌接种铲或接种针，然后在母种试管斜面上切取约1BF.BFQ5平方厘米的菌丝与培养基块迅速移入原种瓶中，然后棉塞经火焰消毒后塞上。如单人接种原种时，可将原种瓶放置在接种架上，使酒精灯与原种瓶口相距1BF.BFQ5厘米。随后按上面操作接入母种即可。
使用接种箱接种应注意以下几个问题：
1要求接种箱密闭性好，接种时要严格遵守无菌操作规程进行。
2接种前应准备好接种工具、菌种和已经灭菌的培养基等，接种数量不宜过多，否则操作不便。
3由于操作人员多而管理不当会使污染率提高，适合小规模生产使用，不适合大规模生产使用。