一、正常人体形态学实验方法
正常人体形态学属于医学科学中形态学科的范畴,以人体形态结构、发生发展及其与功能的关系为观察研究的主要目标。正常人体形学态包含人体解剖学、组织学和胚胎学。
实验前,必须先复习理论内容,并预习实验教程,带实验教程、削好的铅笔(普通HB铅笔和红蓝铅笔)、橡皮、尺子等。实验结束,上交实验报告,将实验物品放回原处,并把实验室整理干净后,方能离开实验室。
人体解剖实验时,按实验内容要求观察示教标本、陈列标本、模型,并结合活体确认结构,完成实验报告,可在老师指导下自己绘制一些简图。组织学实验课主要内容为观察组织和器官的切片。切片按实验要求分三种,即示教切片、观察切片、观察并绘图切片,学生应在老师指导下,集中注意力,独立、有序地观察组织切片。先用肉眼观察切片的一般轮廓、形态和染色的情况,再用低倍镜了解组织切片的全貌、层次、部位关系,最后用高倍镜观察。然而,高倍镜下观察只是局部的放大,应重视低倍镜下的观察,切勿在放置切片后立即用高倍镜观察。绘图是一项重要的基本技能训练,绘图能加深对所学知识的理解和记忆。绘图必须实事求是,看到什么内容就绘什么内容,要注意各种结构之间的大小比例、位置及颜色,正确地反映镜下所见,不能凭记忆或照图谱摹画。绘图过程中注意用相应的彩色笔,如在观察HE染色切片时,可用蓝色笔绘细胞核,红色笔绘细胞质。绘好图后,将各种结构引出标线,用普通HB铅笔标明内容,标线要平行整齐。
二、切片的制作过程及HE染色法
(一)切片的制作过程
取材与固定、脱水透明、浸蜡包埋、切片与贴片、脱蜡染色、脱水透明、封固。
(二)HE染色法
最常用的染色法是苏木精和伊红染色(简称HE染色),以增加组织细胞结构各部分的色彩差异,利于观察。苏木精(Hematoxylin,H)是一种碱性染料,可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色,被碱性染料染色的结构具有嗜碱性。伊红(Eosin,E)是一种酸性染料,能将细胞质染成红色或淡红色,被酸性染料染色的结构具有嗜酸性。对碱性染料和酸性染料亲和力都不强的物质,称为中性物质。细胞内被染成蓝色、红色和呈淡色的颗粒分别称为嗜碱性颗粒、嗜酸性颗粒和中性颗粒。
三、光学显微镜的结构和使用
(一)光学显微镜的结构
普通光学显微镜分机械和光学两部分。机械部分:镜筒、镜臂、载物台、粗细螺旋调节器(粗细调节器)、旋转器。光学部分:目镜、物镜、聚光器、光源。
(二)光学显微镜的使用方法
1.取镜
取镜时,右手握住镜臂,左手托住底座。放置于实验台上时,应将镜臂朝向观察者自己,离实验台边沿约5cm,便于观察。
2.对光
调节物镜转换器将低倍镜(10×)转至与镜筒、目镜在一条线上,此时可听到“咔”的一声轻响。倾斜镜臂,把显微镜调到比较适合观察的角度,双眼对准目镜,打开聚光器底部光圈,调节聚光器,使视野的亮度适宜,双眼通过目镜观察,调节目镜间距,直到双眼看到一共同视野为准。若镜头模糊不清,只能用擦镜纸擦去油污,严禁用手指、手帕或粗纸擦抹,以免磨损镜头;其余部分可用绸绢擦净。
3.低倍镜的使用
取出切片,认清标本的名称和片号,肉眼观察标本的颜色、大小和轮廓;放置标本,将要观察的切片放在载物台上,盖玻片朝上(否则使用高倍镜时不但看不清物像,而且容易把切片压碎),用标本夹将切片固定,调节前后和左右推进器,把标本移至透光孔。抬高镜筒,首先旋转粗螺旋调节器,当视野中出现物像时,再改用细螺旋调节器慢慢调节至看清物像。
4.高倍镜的使用需要用高倍镜(40×)观察的结构,须在低倍镜下找到物像移到视野中央,然后再转换成高倍镜,同时调节细螺旋调节器,直至看清物像。
5.油镜的使用
高倍镜观察后仍需放大时,先抬高镜筒,调节旋转器转换成油镜(100×)。然后在切片上滴加一滴镜油,下降镜筒,侧面观察使油镜镜头直接与油滴接触。再调节细螺旋调节器,直至看清物像。观察结束后,须用二甲苯擦拭干净镜头与切片。
6.显微镜的存放
观察完毕后将镜筒升起,取下标本按号放入标本盒内,将物镜镜头叉开,下降镜筒,直立镜臂,把镜体各部擦拭干净后,将显微镜放入镜箱内。
(李旭升、胡勇)