除上述器具外,所有与人工授精接触的用具如温度计、保温杯和显微镜等,在使用前,必须进行严格而彻底的清洗和消毒。最方便有效的消毒方法是煮沸,且所用水必须是蒸馏水。消毒结束后要烘干水分。不能用煮沸方法消毒的用具和操作人员的手则可用酒精消毒。待酒精充分挥发后再操作。凡与精液接触的器皿,用前必须用生理盐水或稀释液冲洗l~2次。
2.3.2采精方法
2.3.2.1截取法以种母禽对种公禽天然的性刺激为原理,而采得精液的方法。
台禽诱情法:用种母禽引诱公禽,待种公禽踏上母禽背部欲与之交配时,用集精杯挡着母禽的泄殖腔,而采得精液。此法常用于采取番鸭的精液。也可于交配前,在种公禽泄殖腔外系以薄膜袋,待其交配时截取精液。鸡也可用此法。
假阴道法:利用假阴道代替母禽生殖道。当公禽怕爬跨母禽,待公禽阴茎勃起外翻时,使公禽阴茎插入假阴道内采得精液。此法用于鸭、鹅采精,但应用较少。
2.3.2.2电刺激采精法用微弱电流刺激种公禽射精。电刺激采精器主要由变压器、伏特计(0~50伏)、毫安计(0~100MA)、开关和正负电极组成。采精时,正电极刺入公禽髂骨区皮下,负极插入直肠内4cm,并作圆周运动,刺激重复3~5次,每次通电1~3s,间隔5s钟一次,待种公禽阴茎充分勃起后,挤压泄殖腔而采得精液。此法主要用于番鸭采精。鸡、鸭、鹅选种时,亦可用此法采精。
2.3.2.3按摩采精法早在1936年就使用此法采精,一直沿用至今。目前各国虽有所改进,但仍是大同小异。此法是目前应用最广泛的方法。鸡、鸭、鹅均采用此法采精。按摩采精法分为背腹式按摩采精法和背式按摩采精法。背腹式按摩采精法多用于体型较大、重型品种的鸭与鹅的采精。而鸡与体型小的鸭与鹅的采精,多用背式按摩采精。
2.3.3采精
从效率来看最好三人一组配合。一人采精或输精,两人做保护和固定公、母禽的工作。良好的采精应具备的条件:采到干净而不被粪便污染的精液;公禽射出精液的均可全部采到;不降低精液质量;不损伤公禽;操作容易、设备简单。一般情况下,如果采精技术熟练,10min左右可采20~30只中型品种公鸡或30~40只轻型品种公鸡,可采得一杯精液(8~10mL),一个3人的输精小组在半小时内即可输完。
公鸡采精以背式按摩采精法为好,操作简单,又可减少透明液和粪尿污染。助手两手分别握住公鸡大腿基部,并用拇指压住部分翅膀,两腿自然分开,尾部向采精者(下称术者)稍抬高,固定于助手腰部一侧。采精者将集精杯夹于无名指和小手指之间,食指和拇指横跨托在泄殖腔下方,另一手放在公鸡背部,自背鞍部向尾部方向轻快地紧贴背部滑动按摩2~3次,刺激公鸡将尾羽翘起,引起公鸡性感,当看到公鸡尾部向上翘起,泄殖腔外翻,露出乳状突时,迅速将手翻到尾部下面,并尽快将拇指和食指横跨在泄殖腔两侧,从乳状突后面捏住外翻的乳状突,一松一紧地施加适当压力,公鸡即射出乳白色如牛奶样精液时,用集精杯刮接精液。如此反复地按摩采精2~3次,直至公鸡排完精液为止。公鸭、公鹅采精多用背腹式按摩采精法。公禽放在采精台上,助手一手固定公禽两腿,另一手持集精杯。术者一手掌心向下由公禽翅膀根部向尾部方向按摩,至尾根部时稍用力挤压尾根部,另一手用拇指和食指从泄殖腔下面捏住泄殖腔环,双手有节奏地按摩8~10s,当阴茎在泄殖内勃起并感到其变硬时,迅速将在背部的手翻转到尾部下方,拇指和食指按压泄殖腔上l/3部位两侧。这时勃起的阴茎翻出,助手同时迅速将集精杯置于泄殖腔下方,使伸出的阴茎正好插入集精杯内,术者持续地一松一紧地挤压泄殖腔(阴茎基部),直至排完精液为止。公鸭亦可用台禽诱情法采精。
2.3.4采精时注意事项
采精前公禽应隔离饲养;采精应在停水断料3~5h后进行,以防采精时粪尿污染精液;应根据各个公禽的性反射习惯,把握适宜的按摩次数和用力的大小;按摩时间过长的或用力过大,公鸡都会形成逆刺激而不发生性反射,或因排粪尿和损伤粘膜而污染精液;挤压泄殖腔要及时和用力适当,挤压过早或过迟采不出精液,而用力过大会造成组织受伤而出血;采精时,手指和集精杯都不可接触交配器;一只公禽宜用一个集精杯,采后再将精液用滴管合并,以防不洁精液影响整杯质量;被粪便等污染的精液应舍弃;冬季采精时,集精杯要预热至35℃~40℃。整个采精过程应遵守无菌操作;精液采下后做好保温并尽快作检查或稀释保存。
2.3.5采精频率和公禽使用年限
生产中公鸡每周采精5次,公鸭、公鹅隔天采精为好。公鸡、公鸡采精在下午进行;公鸭的采精宜在上午进行。
公鸡一般使用当年的青年鸡,育种用公鸡精液质量好者可用2~3年。公鸭一般用一年,多则用2~3年,对于2岁过肥公鸭应予淘汰。公鹅以1.5为宜。
2.4输精技术
人工授精操作过程中,采到干净而不被粪便污染的精液固然十分重要,但要获得高的受精率,输精技术则是关键。
输精是用一定的器具将适量精液注入母禽生殖道一定部位的技术。输精深度(部位)、输精时间和输精时间间隔、输精剂量对种蛋的受精率影响很大。
2.4.1输精方法
输精时两人轮流抓鸡翻肛,输精者可以不停地左右输精,提高劳动效率。
2.4.1.1阴道输精法(亦称输卵管口外翻输精法)。由助手固定好母禽,一手紧紧握住母鸡的两腿基都,将鸡尾部及双腿拉出笼门,使鸡的胸部紧贴笼门下缘,以增加母鸡腹腔内压力,另一手拇指和食指横跨泄殖腔上下两侧,并按压泄殖腔,使输卵管外翻,团出输卵管口,术者将输精管插入,输入输液。此法常适用于对鸡和小型鹅输精。
2.4.1.2深部阴道输精法(亦称手指引导输精法)。助手将母禽固定好,术者用食指插入母禽泄殖腔,探到输卵管口后插入食指,再将输精管沿食指插入输卵管内,输入精液。此法多用于鸭、鹅的输精。
2.4.1.3直接插入阴道输精法。助手固定好母禽,术者用左手将母禽尾巴压向一侧,并用母指按压泄殖腔下缘,使泄殖口张开,右手以拿毛笔方式持输精管上部,输精管插入泄殖腔后就向左方插进,便可插入输卵管、输入精液。这亦是鸭、鹅常用的输精方法。
2.4.1.4子宫内输精法(亦称臁部注射输精法)。母禽侧卧保定,左侧向上。用5号针头接注射器。助手以食指伸入泄殖腔,隔着直肠将子宫内硬壳蛋固定靠左侧腹壁,术者从蛋的前1/3处的腰部进针,使针头紧靠蛋的前端,再向头部水平方向推进一些,注入精液。此法用于子宫内有蛋时的输精。
2.4.1.5扩张器输精法。利用扩张器扩张开母禽的泄殖腔,找到输卵管,然后插入输精管注入精液。此法应用最少。
2.4.2输精部位
家禽的输精受精率实际上是由输精深度决定的。采用不同的输精部位对种蛋的受精率有明显的影响,到达受精地点的精子数量在很大程度上取决于输精部位。有关精液输入母禽生殖道深度的问题,人们各抒己见。
阴道内输精则有部分精子不能通过子宫阴道联合处。若在子宫内输精,则精子几乎全部上行到受精地点,可以获得高受精率。但是家禽阴道部有一“V”形弯曲,同时子宫阴道部又有一强有力的括约肌,致使输精管难于插入子宫内输精。而且子宫内输精会增加对输卵管的刺激和带入细菌,使卵巢和输卵管机能受到扰乱,造成子宫内卵过早排出和引起产蛋率下降。实际观察表明,公母鸡自由交配时,公鸡阴茎突起很短,是不可能插入子宫部的,母鸡在公鸡交配动作刺激下,肛门外翻至多是阴道外露接受射进的精液。在阴道子宫部进行浅部输精,基本上与公鸡自由交配时的情况相仿。因此目前多采用阴道输精法。输精深度鸡为注入输卵管口内1.5~3cm,鸭、鹅为4~6cm。
2.4.3输精时间
掌握好最佳的输精时间,是获得高受精率的必要条件。母禽子宫里有蛋存在时,会影响精子向受精地点运行,若此时输精,则明显影响受精率和受精持续时间;子宫内无蛋时输精会得到满意的授精效果。据此,在生产中母鸡一般在下午4点钟以后输精,此时,母鸡基本上都已产下蛋。鸭子一般多于夜间产蛋,输精宜在上午进行。鹅的输精可在白天12点钟以后进行,那时大部分鹅已产蛋。
受精率的最高峰取决于品种、品系、也取决于不孕的母鸡数和输入的活精子数。鸡种不同,受精率有所差别;同一鸡种,鸡群中不孕母鸡数多少,对受精率影响很大。精液中死精子和畸形精子多少,对受精率有决定性的影响。
饲养种鸡,要想保持整个供种期间有较高的受精率,就必须力求使输精后受精率的曲线高峰平稳地连成一条直线,避免曲线降落是十分重要的。对此,必须掌握产受精蛋的时间变化,把每次输精的时间提前在受精率曲线下降之前两天,也就是说掌握好适当的输精间隔时间,这样使曲线变成一波未落一波又起,造成后浪推前浪的局面,曲线的高峰始终保持在高的水平线上。提前输精只有好处而没有坏处,推迟输精,对受精率就有明显的影响了。3~4天输精1次也没有必要,过量输精和缩短输精间隔往往会降低受精率,原因是造成血清中精子的抗体滴度增加。
2.4.4输精时间间隔和输精剂量
由于公禽的精子能在母禽生殖道内存活相当长的时间,并保持有受精能力,故与家畜输精不同。一般来讲,母鸡能在12~16天内产受精蛋,个别情况下,35天仍见受精蛋。
输精的时间间隔和输精剂量直接影响到精子在输卵管内保持受精能力的时间和种蛋的受精率。延长输精时间间隔、节约精液,还能在一个较长的时间内保持高的受精率,这在人工授精工作中具有明显的经济意义。排卵是有一定规律的,一般是在蛋产出后20min左右才发生。卵子受精时只有一个精子进入,但在输卵管中要有足够的精子数,并在漏斗部保证有健壮的精子能及时与卵子相遇,就显得十分重要。现在已经证明,获得高受精率所需最起码的精子数量为4000~7000万个。
根据上述为保险起见,一般要输入8000万个~1亿个精子。正常情况下,生产鸡群5~7天输精一次,输入剂量为0.025~0.05mL,未稀释的新精液,其含有效精子数为0.5~1亿,最好为1亿,母鸡第一次输精时,应注入两倍精液量。48h后便可收集种蛋。若以稀释的精液输精则要相应的增加输精量,一般鸡场均采用未稀释的新鲜精液输精。轻型品种公鸡射精量较少,但精子浓度大;中型品种精液量大,但精子浓度较低。因此在掌握输精量时要考虑品种的特点。同时随鸡龄的增加,温度的变化,要适当增加输精量,以获得稳定的高受精率。公鸡年龄增大,精子浓度降低,活力也下降。热天代谢加快,死精多。如不适当增加输精量,就不能保证足够的有授精能力的精子数。鸭、鹅5~7天输精一次,新鲜未稀释的精液为0.03~0.05mL。水禽射精量小,采用稀释的精液可多配母禽,输精量为0.05~0.1mL,其中含有效精子数鸭为0.6~0.8亿、鹅为0.2~0.8亿。第一次输精时精液剂量增加一倍,授精72h后可收集种蛋。
2.4.5输精注意事项
精液采下后,应尽快输精,未稀释的精液存放时间不得超过半小时;抓取母禽和输精动作要轻缓,插入输精管不要太猛和用力过大,以免惊吓、损伤母公和造成输卵管损伤;输精时遇有硬壳蛋时动作要轻,而且要将输精管偏向一侧缓缓插入;输精液的同时,助手要放松对母禽腹部压力,以免引起精液逆出输卵管;用稀释的精液输精,应防止稀释倍数过大,使粘稠性降低,造成输精后精液回流;每输完一只母鸡,输精吸管要用消毒药棉擦拭,以防污染;遵守无菌操作。
实践证明,产蛋的母鸡,翻肛是十分容易的。只要操作熟练,掌握要领,手指轻压下腹部,母鸡也会自然翻肛。捉鸡时,凡乱叫乱撞而显得不安的母鸡,十有八九是停产的母鸡,这种母鸡很难翻肛,没有输精的必要。
2.5家禽精液的品质评定
为提高种蛋的受精率,一般来说选育外貌好、体质健壮的公禽,但在人工授精的条件下,还应进行实验室的精液品质评定,鉴定精液品质的优劣,以便对选留公禽和确定精液能否使用。
2.5.1精液的成份和一些主要生理指标
家禽的精液是由精子和精清组成。精清是精细管、附睾和输精管的分泌物,同时还混入透明液。按摩采精时,总有不同程度地混入透明液,透明液是泄殖腔中淋巴褶和脉管分泌的一种透明液体,易于凝固。透明液还含有提高精子活力、呼吸和葡萄糖消耗因子,其促使精子早衰,故采精时,应尽量避免透明液混入精液。
与家畜精液相比,家禽精液量小,但其精子密度高。