一、包埋方法
(一)包埋剂
1.石蜡软石蜡(熔点45℃)适用于质地软的组织(如胎儿组织)。硬石蜡(熔点60℃)适于致密纤维组织、骨等。一般选用熔点56℃的石蜡,对各种组织大致均可适用。气温高的地方不能选用软石蜡,否则蜡块易熔,保存不便。
2.塑料类多聚化合物加入石蜡中,可增加韧性和弹性。
3.二甲基亚砜(DMSO)可加入石蜡中,促进浸蜡过程。在没有真空浸蜡装置时特别适用。
4.橡胶加入石蜡中可增加弹性。特别适用于环状组织,可使切片中组织形状保持不变。
5.蜂蜡与石蜡合用(按10%~20%比例加入),可使组织块韧性均一,弹性增加,切片不起皱。
(二)包埋装置
主要是各种型号的模子(不锈钢或塑料的)。
(三)石蜡包埋技术
镊子加热后,取出浸蜡的组织盒,从中央取出组织块,放在大小合适并已加入部分石蜡的模子底部。将模子从加热板上移到冷却板上,底部石蜡很快凝成一层,轻压组织块,使其位置恰当。同时包埋多块组织时,操作必须迅速,否则组织块位置尚未调整好,石蜡便已完全凝固。然后注入另一部分石蜡,冷凝约30分钟,拆去模子。
(四)火棉胶包埋
火棉胶在以往使用较多,因其对硬组织或易碎组织(眼、神经组织)包埋效果较好。现在由于多种新型石蜡产品的问世,已较少使用。但因为火棉胶包埋过程中不需加热,故对不耐热的组织的浸透包埋仍十分有价值。概括起来,火棉胶包埋的优点是:①组织收缩和变硬极轻(因未加热);②组织中各成分位置关系保存良好;③对研究体积大的标本、胚胎标本等十分有用。
火棉胶包埋有下列缺点:①时间长,浸透需7~10天;
②易受潮,结果不能凝固,形成的块太软,不能切片;③组织块必须保存在70%~80%酒精中;④切片时,切片刀和组织块都须用70%~80%酒精保持湿润⑤切片较厚,很难切出薄于10微米的切片;⑥包埋中需用易燃品乙醚。
市售火棉胶分干品和湿品(在纯酒精中保持湿润状态)。
干品较好,可直接使用,但价格较贵,湿品须先放在滤纸上入37℃孵箱中过夜,然后才能配制浓度准确的火棉胶液。
干的火棉胶按每100毫升纯酒精加24克的比例加入纯酒精中,浸泡至其溶解。浸泡期间须常搅拌,完全溶解后,加入100毫升乙醚,即得12%火棉胶溶液。用它配制其他浓度的溶液。
配好后的火棉胶溶液须贮存在玻璃瓶中,盖好瓶塞,以防蒸发及受潮。乙醚为易燃品,须加小心。
1.浸透组织切成5毫米以下薄片。固定、脱水后按下列程序处理。
(1)湿法
1)乙醚、纯酒精各等分混合,浸泡24小时;
2)4%火棉胶溶液2~3天;
3)8%火棉胶溶液,2~3天;
4)12%火棉胶溶剂,2~3天;
5)包埋。
(2)干法
1)乙醚、纯酒精各等分混合,浸泡24小时;
2)4%火棉胶溶液2~3天;
3)8%火棉胶溶液,2~3天;
4)12%火棉胶溶剂,2~3天;
5)松柏油、氯仿等份混合,浸24小时;
6)松柏油3份、氯仿l份混合后,浸24小时;
7)松柏油,24小时。
2.火棉胶包埋技术
(1)在深2~3厘米以上的模子中,注入浓火棉胶(12%),再注入组织块,调整好方位。
(2)模子置入钟罩/干燥器中12小时,让火棉胶内的气泡完全消失。真空可以加速其消失。
(3)打开钟罩/干燥器,让火棉胶变干变硬,直至指压无痕迹。模子旁放一氯仿棉球可以加速此过程。
(4)如用湿火棉胶法切片,取出组织块,倒置浸入80%酒精中,切片时再取出。
3.火棉胶常用于包埋较大组织,此时将包埋块固定在硬橡胶或木板上,才能装上切片机
方法如下:
(1)包埋块修成立方形;
(2)硬橡胶或木块表面涂以2%火棉胶,将包埋块紧压 其上,加压至黏合牢固(注意:涂抹前须先将表面打糙)。
(3)切片前1小时,放入80%酒精中使之变硬。
二、 标本包埋的方位
包埋时技术员须仔细检查每一组织块,看清其结构,再决定如何包埋。技术员须具有大体标本结构的基本知识,并随时与医师讨论,这样才能达到显示出所需结构的最终目的。医师要求某一标本按某特定方位包埋时,应作好标记(如表面或切缘可以墨汁标记),或在工作单上写明要求。
(一) 通则
(1)组织块应展平,操作须轻柔。
(2)如组织块中各层结构阻力不等,应使阻力低的部分先接触刀口,阻力大的部分最后切到。以避免硬组织将较软的组织挤开。
(3)组织四周应有不少于2毫米的石蜡,以保证切片时组织有充分的支持。
(二)管状结构(如血管、输卵管)
应使切片为横切面。
(三)上皮结构(皮肤、肠壁组织等)
应使切片能显示各层结构。上皮应位于上面,使切片时最后切到上皮,这样可减少变形。多块组织包于一起时,应排成整齐的一排,上皮均朝向上方。组织块太小时不易辨认上皮,可在组织自动处理机的第二缸纯酒精中加5毫升酒精—伊红贮存液,使各层结构易于辨认。伊红在切片水化时被冲掉,不影响染色。
(四)大而致密的组织块(如子宫壁、甲状腺、骨等)
应使组织与刀口略成角度,以减少阻力,否则易把组织从蜡块中挤出去。这样还可减少刀的振动。
(五)多块小组织、淋巴结等
应排列整齐,但应留有空隙。小的长条形组织应排列成长轴与刀缘平行,减少变形和皱缩。
(六)囊状组织
小囊状组织正中剖开,切面向下包埋。
(七)墨汁标记的表面和切缘
标有切缘者,使切缘在切片上位于一侧;标有表面者,使表面朝上(与刀口相对)。