目的——将组织中可除去的水分尽量去除,用某种介质(如石蜡)取而代之,使组织具有合适的便于切片的硬度。
脱水一般使用酒精,从低浓度到高浓度,组织自动处理机借助热力、真空、压力和振动以加强效果,可于一夜之内完成处理过程。常规石蜡切片使用的透明剂为二甲苯。
以下简单介绍常规石蜡切片的组织处理方法。
一、短时程序(用于活检小组织)(共3~4小时计)
(1)固定时间不得少于3小时;
(2)短暂流水冲洗;
(3)80%酒精浸泡;
(4)95%酒精浸泡3次,每次15~20分钟;
(5)纯酒精浸泡3次,每次15分钟;
(6)纯酒精—二甲苯溶液(等量混合液),15分钟;
(7)二甲苯,2次,每次15分钟;
(8)石蜡,3次,每次15分钟;
(9)石蜡,真空中,15~20分钟;
(10)包埋。
二、常规程序(总时间14~16小时)(组织自动处理机)
(1)80%酒精,1小时;
(2)95%酒精,3次,每次1小时;
(3)纯酒精,3次,每次1小时;
(4)二甲苯,3次,每次1小时;
(5)石蜡,3次,每次1小时;
(6)石蜡,真空中,1小时;
(7)包埋。
三、手工程序(用于较大的标本,如不能置入组织盒中者)
(1)80%酒精,1小时;
(2)95%酒精,3次,每次2小时;
(3)纯酒精,过夜;
(4)纯酒精,2次,每次1小时;
(5)二甲苯,3次,每次1小时;
(6)石蜡,2次,每次2小时;
(7)让石蜡凝固(组织仍放在石蜡中);
(8)石蜡,真空,2小时;
(9)包埋。
组织处理的时间不可轻易缩短,否则切片、染色均会出现问题,导致诊断困难。
自动处理机有时亦会发生故障,导致组织干涸、烤焦、透明剂处理过久等等,干涸组织可用下法重新处理。
试剂:甲醛—醋酸钠贮存液
甲醛(38%~40%) 10毫升
醋酸钠 2克
自来水90毫升
甲醛—甘油工作液:
甲醛醋酸钠贮存液90毫升
甘油10毫升
步骤:
(1)干涸标本或组织块置于熔化石蜡中l小时;
(2)二甲苯,3次,每次1小时;
(3)纯酒精,2次,每次1小时;
(4)95%酒精,2次,每次1小时;
(5)流水冲洗,30分钟;
(6)置于甲醛—甘油工作液中,直至组织变软(放置时间不超过8小时,对组织无不良影响);
(7)再按常规组织处理法处理。
透明剂处理过久的组织,可从上述第3步开始重新处理。
烤焦的组织难以重新处理。