有些病原体可以在H．E．切片上观察到，但特殊染色更敏感和特异。寄生虫从体积很小的原虫到肉眼可见的虫体，种类很多。疟原虫和锥虫可用姬姆萨染色显示；卡氏肺囊虫用Grocott六胺银真菌染色法显示，PAS和Best胭脂红染色能较好显示溶组织阿米巴，而吸虫、线虫和绦虫等用H．E．染色即可。本章主要介绍在石蜡切片和涂片上显示各种病原微生物及寄生虫的特殊染色方法。核酸杂交和免疫组化方法能很好地显示病原微生物的存在。特异性更强，应该积极推广使用。
一、改良Btown－Hopps革兰氏染色法
1．固定10％中性缓冲福尔马林。
2．切片石蜡，6微米。
3．试剂
1％结晶紫溶液 （见第15章）
1％碱性品红液 （见第15章）
革兰氏碘液（见笫15章）
Gallego氏分化液
蒸馏水100毫升
37％～40％甲醛溶液2毫升
冰醋酸1毫升
苦味酸—丙酮液 （见第15章）
丙酮
丙酮二甲苯液 （见第15章）
4．步骤
（1）脱蜡至蒸馏水；
（2）1％结晶紫溶液染1分钟；
（3）自来水漂洗；
（4）革兰氏碘液1分钟；
（5）自来水漂洗；
（6）丙酮脱色至背最无色；
（7）立即用自来水冲洗；
（8）置于1％碱性复红液中5分钟；
（9） 自来水冲洗；
（10） 置于Gallego氏分化液中，2次，每次1分钟；
（11）自来水冲洗；
（12）将切片置于染色缸内；
（13）倒入丙酮液处理30秒钟；
（14）置入苦味酸—丙酮液2～3分钟；
（15）丙酮二甲苯液浸泡2次；
（16）二甲苯透明2次；
（17）树脂封固。
5．结果
革兰氏阳性菌 蓝色
革兰氏阴性菌 红色
背景 黄色
6．注意事项
（1）第2～11步于染色架上进行。
（2）未改良时采用0．1％碱性复红液。
（3）第12～16步在染色缸内完成。
（4）未改良时复染用的是酒石黄。
二、Brown和Brenn氏革兰氏染色法
1．固定10％中性缓冲福尔马林。
2．切片石蜡，6微米。
3．试剂
1％结晶紫溶液
5％碳酸氢钠溶液
革兰氏碘液
0．25％碱性品红贮存液
碱性品红工作液
0．25％碱性品红贮存液 10毫升
蒸馏水90毫升
丙酮
苦味酸—丙酮液
苦味酸0．1克
丙酮100毫升
丙酮二甲苯液
丙酮50毫升
二甲苯50毫升
4．步骤
（1）脱蜡至蒸馏水；
（2）切片平放于染色架上，滴加结晶紫溶液约l毫升（20滴左右），5％碳酸氢钠溶液5滴，轻轻搅动1分钟。两液亦可于临用时混匀后滴加；
（3）自来水冲洗；
（4）用革兰氏碘液浸泡1分钟；
（5）自来水冲洗，用滤纸吸去水分，勿干；
（6）丙酮脱色至无多余紫色染料流下为止；
（7）自来水冲洗；
（8）碱性品红工作液淹没1分钟后，取出用自来水冲去浮色；
（9）切片放入盛有自来水的玻璃染缸内；
（10）切片逐一在丙酮液中浸一下，然后立即用苦味酸丙酮液分色直到切片呈淡黄；
（11）丙酮中迅速浸泡一下，丙酮二甲苯液中快速浸泡一下；
（12）二甲苯透明2次，树脂封片。
5．结果
革兰氏阳性菌蓝色
革兰氏阴性菌红色
放线菌丝蓝色
核 红色
其他组织成分 黄色
6．注意事项
（1）过去曾用乙醚—丙酮液作脱色剂，因乙醚不安全，现已不用，而只用丙酮脱色。
（2）切片在开始用丙酮处理前，一直置于水中。注意切片不需吸干即可直接开始丙酮处理。第10～12步要一张一张地进行。
三、Fite抗酸杆菌染色法
1．固定10％中性缓冲福尔马林。
2．切片石蜡，6微米。
3．试剂
二甲苯花生油液
花生油 1份
二甲苯 2份
Ziehl－Neelsen石炭酸品红液
苯酚晶体（熔化） 2．5毫升
纯酒精 5毫升
碱性品红 0．5克
蒸馏水 50毫升
用前过滤。
1％酸酒精
亚甲蓝贮存液 （见第15章）
亚甲蓝工作液 （见第15章）
亚甲蓝贮存液 10毫升
蒸馏水 90毫升
4．步骤
（1）切片放入二甲苯花生油液中浸泡2次，每次12分钟（脱蜡）；
（2）空气干燥15分钟，余下油膜可防止切片收缩并保护其不受损伤；
（3）滤过的石炭酸品红液染30分钟；
（4）自来水冲洗10分钟；
（5）酸酒精分化直到切片呈淡粉红色；
（6）自来水冲洗3分钟；
（7）亚甲蓝工作液复染30秒钟至1分钟；
（8）用自来水冲洗掉过量的染液；
（9）95％和100％酒精快速脱水各2次（注意不要让切片在酒精中停留时间过长）；
（10）二甲苯透明；
（11）树脂封片。
5．结果
麻风杆菌和其他抗酸杆菌 红色
诺卡氏菌菌丝 红色
背景 淡蓝色
四、Ziehl－Neelsen抗酸杆菌染色法
1．固定任何固定液均可。
2．切片石蜡，4～6微米。
3．试剂
Ziehl－Neellsen石炭酸品红液
1％酸酒精（见第15章）
亚甲蓝贮存液 （见第15章）
亚甲蓝工作液 （见第21章）
4．步骤
（1）脱蜡至蒸馏水；
（2）用滤过的石炭酸品红液染30分钟；
（3）自来水彻底冲洗；
（4）用l％酸酒精脱色至切片呈浅粉红色；
（5）自来水彻底冲洗8分钟；
（6）用亚甲蓝工作液滴染，切片染色应显浅蓝色；漂染可影响细菌的观察；
（7）自来水冲洗，然后用蒸馏水洗；
（8）95％、100％酒精，快速脱水各2次，二甲苯透明2次约2分钟；
（9）树脂封固。
5．结果
抗酸杆菌 亮红色
红细胞 橘黄色
其他组织成分 蓝色
五、乙肝表面抗原维多利亚蓝染色法
1．固定10％中性缓冲福尔马林。
2．切片石蜡，6微米。
3．试剂
维多利亚蓝溶液
糊精0．5克
维多利亚蓝B2克
同荤二酚（雷琐辛）4克
蒸馏水200毫升
极慢加热至沸点后缓慢点滴加入已煮沸的
29％三氯化铁液25毫升
混合后煮沸3分钟，冷却过滤。将滤纸及沉淀物一起移入60℃烤箱内烘干，约1小时左右。将滤纸连同上面的沉淀，一并投入
70％酒精400毫升
搅拌3小时后，依次加入
浓盐酸4毫升
石炭酸6克
一般不加温，取液体再搅拌1小时。
0．3％高锰酸钾贮存液（见第15章）
0．3％硫酸贮存液（见第15章）
高锰酸钾—硫酸工作液
0．3％高锰酸钾贮存液50毫升
0．3％硫酸贮存液50毫升
临用时配制。
4％亚硫酸氧钠液
亚硫酸氢钠4克
蒸馏水100毫升
用时现配。
4．步骤
（1）脱蜡至蒸馏水；
（2）高锰酸钾—硫酸工作液，5分钟；
（3）4％亚硫酸氧钠液，1分钟；
（4）自来水轻洗1分钟；
（5）70％酒精洗2次；
（6）维多利亚蓝溶染色24小时以上；
（7）70％酒精洗数分钟；
（8）自来水轻洗数分钟；
（9）核固红复染数分钟；
（10）自来水轻洗5分钟；
（11）95％酒精、纯酒精、二甲苯各2次；
（12）树脂封固。
5．结果
乙肝表面抗原 蓝色
脂褐素、肥大细胞、黏液、弹力纤维蓝色
核仁、胞浆红色
胆色素 红色
含铁血黄素 蓝色
铜离子相关蛋白 蓝色
六、肝炎表面抗原改良地衣红染色法
1．固定10％中性缓冲福尔马林。
2．切片石蜡，6微米。
3．试剂
0．15％高锰酸钾液
高锰酸钾 0．15克
蒸馏水 100毫升
用时加0．15毫升浓硫酸。
1．5％草酸液（见第21章）
地衣红液
地衣红1克
70％酒精 100毫升
浓盐酸1毫升
4．步骤
（1）脱蜡至蒸馏水；
（2）0．15％高锰酸钾液，5分钟；
（3）蒸馏水换洗2次；
（4）放入1．5％草酸溶液中直到切片无色（通常需10～15秒钟）；
（5）自来水轻洗1分钟；
（6）蒸馏水漂洗2次；
（7）95％酒精洗2次；
（8）地衣红液染色，过夜；
（9）95％酒精、纯酒精？熏各2次；
（10）二甲苯透明3次；
（11）树脂封固。
5．结果
乙肝表面抗原深棕色
弹力纤维深棕色
铜离子相关蛋白深棕色
七、Mann亚甲蓝伊红染色法
1．固定10％中性缓冲福尔马林或95％酒精。
2．切片石蜡，6微米。
3．试剂
亚甲蓝伊红染液
1％亚甲蓝水溶液 6毫升
1％伊红Y水溶液 6毫升
蒸馏水28毫升
分化液
无水酒精100毫升
40％氢氧化钠 2～3滴
4．步骤
（1）脱蜡至蒸馏水；
（2）亚甲蓝伊红染液8～24小时；
（3）蒸馏水洗3次；
（4）分化液分化30秒钟；
（5）纯丙酮迅速脱水溶液；
（6）二甲苯透明，树脂封固。
5．结果
包涵体、内基氏体、红细胞红色
细胞核蓝色
八、改良Warthin－Starry染色法（pH4．O）
（用于螺旋体及幽门弯曲杆菌、猫抓病病原体等）
1．固定10％中性缓冲福尔马林。
2．切片石蜡，6微米。
3．试剂
1％柠檬酸液
柠檬酸 1克
蒸馏水 100毫升
加酸水溶液
无菌水 1000毫升
加1％柠檬酸使pH值达4．0。
1％银浸染液
硝酸银 1克
加酸水溶液 100毫升
2％硝酸银液
硝酸银2克
加酸水100毫升
盛于烧瓶内，置54℃水浴中。
5％明胶液
明胶5克
加酸水100毫升
盛于烧瓶内，置54℃水浴中。
0．15％邻苯二酚（焦儿茶酚）
邻苯二酚 0．15克
酸水 100毫升
盛于烧瓶内？熏置54℃水浴中。
显色液
2％硝酸银液 1．5毫升
5％明胶液 3．75毫升
0．15邻苯二酚液2毫升
用前按上述顺序加入小烧杯内，在加邻苯二酚前要将硝酸银液和明胶液充分混合。
4．步骤
（1）脱蜡至蒸馏水；
（2）1％硝酸银液浸染30分钟，温度保持在43℃；
（3）切片放在玻棒染色架上，用显色液淹没切片，直至组织颜色呈棕黄色；
（4）立即用热自来水充分冲洗以终止染色；
（5）95％酒精、纯酒精、二甲苯各2次，每次2分钟；
（6）树脂封固。
5．结果
螺旋体及其他一些微生物 黑色
背景 褐色至黄色
九、Gaffny氏一小时姬姆萨染色法
1.固定10％中性缓冲福尔马林。
2．切片石蜡，4～6微米。
3．试剂
天青Ⅱ－伊红液
放置几个灭菌玻璃球在1000毫升棕色容量瓶内，加入天青Ⅱ－伊红 1．3克
甘油80毫升
56℃2小时，混合，冷却，再加入
甲醇170毫升
丙酮170毫升
May－Gronwald染色液（准备1000毫升烧瓶一个）
May－Grtlnwald染料 0．15克
甲醇290毫升
丙酮290毫升
姬姆萨贮存液
将上述天青Ⅱ－伊红液、May－Grtlnwald液混合，贮存备用。
醋酸溶液（pH4．7）
冰醋酸1滴
蒸馏水1000毫升
姬姆萨工作液
姬姆萨贮存液10毫升
醋酸溶液（pH4．7） 50毫升
用时现配，用后废弃。
4．步骤
（1）脱蜡至蒸馏水；
（2）新配制的姬姆萨工作液染1小时；
（3）光镜下观察，检查效果（若背景呈蓝色或对比不分明，可能是因为醋酸液太陈旧，应换新鲜醋酸液）；
（4）纯酒精脱水3次；
（5）二甲苯透明，3次；
（6）树脂封固。
5．结果
胞浆粉红色
核蓝色
红细胞红色
肥大细胞颗粒紫色
细菌蓝色
疟原虫蓝色
十、Grocott六胺银真菌染色法（GMS）
1．固定10％中性缓冲福尔马林。
2．切片石蜡，6微米。
3．试剂
4％铬酸溶液
5％硝酸银溶液
3％乌洛托品溶液
5％硼砂液
硝酸六胺银贮存液
5％硝酸银液 5毫升
3％乌洛托品溶液 100毫升
硝酸六胺银工作液
硝酸六胺银贮存液25毫升
蒸馏水25毫升
5％硼砂液2毫升
用时现配。如出现混浊时则不能使用。
l％亚硫酸氢钠液（见第15章）
0．1％氯化金液（见第15章）
5％硫代硫酸钠液（见第15章）
0．2％亮绿贮存液（见第15章）
亮绿工作液
亮绿贮存液10毫升
蒸馏水50毫升
4．步骤
（1）脱蜡至蒸馏水；
（2）4％铬酸溶液氧化1小时；
（3）自来水冲洗数秒钟；
（4）亚硫酸氢钠液中1分钟（除去残存铬酸溶液）；
（5）自来水冲洗5～10分钟； ．
（6）蒸馏水换洗3～4次；
（7）置硝酸六胺银工作液中，温度58℃～60℃，50～60分钟；
（8）蒸馏水换洗6次；
（9）置氯化金溶液中约2～5分钟；
（10）蒸馏水洗；
（11）置于硫代硫酸钠液2～5分钟；
（12）自来水彻底冲洗；
（13）亮绿工作液复染30～45秒钟；
（14）95％酒精、纯酒精、二甲苯各2次，每次2分钟；
（15）树脂封固。
5．结果
真菌黑色
黏液深灰色
菌丝体灰红色
背景绿色
十一、Cofites改良Fite抗酸染色法（用T－诺卡氏菌）
1．固定10％中性缓冲福尔马林或其他固定液。
2．切片石蜡，4～6微米。
3．试剂
二甲苯花生油液
花生油1份
二甲苯2份
1％硫酸溶液 （见第15章）
Zlehl－Neelsan石炭酸品红液
熔化的苯酚结晶2．5毫升
纯酒精5毫升
碱性品红0．5克
蒸馏水50毫升
使用前过滤。
亚甲蓝贮存液（见第15章）
亚甲蓝工作液
4．步骤
（1）二甲苯花生油中脱蜡2次，每次12分钟；
（2）二甲苯中浸一下，空气干燥约15分钟；
（3）石炭酸品红液染10分钟；
（4）自来水冲洗1～2分钟；
（5）1％硫酸溶液分化约5～10分钟，振动以尽快去掉背景着色；
（6）自来水冲洗；
（7）用亚甲蓝工作液淡淡复染一下；
（8）自来水冲洗；
（9）吸干水分，空气干燥数分钟；
（10）直接用树脂封固。
5．结果
诺卡氏菌紫红色
背景浅蓝色