书城医学病理技术手册
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第14章 糖类(2)

(2)为了防止酶消化液干燥,可先在盒子底部加上数层湿滤纸,然后将玻棒放在其上。切片孵育时一定要加盒盖,以防止消化液干燥。

七、Mowry氏胶体铁染色法

1.固定10%中性缓冲福尔马林,勿用重铬酸盐固定剂。

2.切片石蜡,6微米。

3.试剂

2%三氯化铁溶液 (见第15章)

Mfiller氏胶体铁贮存液

蒸馏水250毫升

加热至沸腾,再加

29%三氯化铁溶液4.4毫升

三氯化铁应一滴一滴地加入,边加边搅拌,液体变成暗红色时,停止加热,冷却到室温,由于液体蒸发,应补加蒸馏水至250毫升。将此液包入透析纸内,放入5~10倍蒸馏水中透析19小时。4小时换一次蒸馏水,共换4~5次。用whatmanl号滤纸过滤2次,去除氧化铁粒。

滤后在室温下保存(溶液pH值保持在2~2.5之间,可保存2年)。

Mnllcr氏胶体铁工作液

Maller氏胶体铁贮存液 20毫升

蒸馏水15毫升

冰醋酸5毫升

12%醋酸溶液(见第15章)

5%亚铁氰化钾贮存液 (见第15章)

5%盐酸贮存液 (见第15章)

亚铁氰化钾盐酸工作液

亚铁氰化钾(5%储存液) 40毫升

盐酸(5%储存液) 40毫升

Van Gieson溶液或核固红溶液

4.步骤

(1)切片脱蜡至蒸馏水;

(2)12%醋酸溶液,3分钟;

(3)Maller氏胶体溶液1小时;

(4)12%醋酸溶液漂洗,4次,每次3分钟;

(5)亚铁氰化钾—盐酸工作液20分钟;

(6)自来水洗5分钟;

(7)蒸馏水中漂洗;

(8)Van Gieson溶液,复染5~7分钟,或核固红溶液5分钟;

(9) 95%酒精、纯酒精及二甲苯脱水透明,每步2次,每次2分钟;

(10)树脂封固。

5.结果

酸性黏多糖蓝色

八、胶体铁-PAS染色法

1.固定10%中性缓冲福尔马林。

2.切片石蜡,6微米。

3.试剂

29%三氯化铁溶液

Maller氏胶体铁贮存液20毫升

蒸馏水250毫升

加热至沸,再加入

29%三氯化铁溶液水4.4毫升

Mnllcr氏胶体铁工作液

Maller氏胶体铁贮存液20毫升

蒸馏水15毫升

冰醋酸5毫升

12%醋酸溶液(见第15章)

亚铁氰化钾—盐酸工作液

0.5%高碘酸溶液 (见第15章)

Coleman’s Schfff试剂

碱性品红1克

蒸馏水(加热到60℃)200毫升

加热,至沸点即刻停止,冷却后加偏亚硫酸氢钾2克

1摩尔盐酸10毫升

让其漂白24小时,然后加活性炭0.5克

振摇1分钟,然后用粗滤纸过滤。重复过滤至溶液无色为止。冰箱内贮存。

4.步骤

(1)脱蜡至蒸馏水;

(2)12%醋酸溶液,3分钟;

(3)Muller氏胶体铁工作液,1小时;

(4)12%醋酸溶液漂洗4次,每次3分钟;

(5)亚铁氰化钾—盐酸工作液,20分钟;

(6)流水洗5分钟后置于蒸馏水中;

(7)过碘酸溶液中氧化5分钟;

(8)蒸馏水漂洗3次;

(9)置于Coleman Sehlff试剂中10分钟;

(10)温流水洗5分钟;

(11)蒸馏水漂洗;

(12)95%酒精、纯酒精及二甲苯脱水透明,每步2次,每次2分钟;

(13)树脂封固。

5.结果

酸性黏液深蓝

中性黏液(含六碳糖)红至紫红

九、醛品红,pH1.0

1.固定10%中性缓冲福尔马林。

2.切片石蜡,6微米。

3.试剂

醛品红溶液

碱性品红1克

70%酒精200毫升

浓盐酸2毫升

三聚乙醛(仲醛)2毫升

室温放置2~5天至颜色呈深紫红色。该溶液pH为1.7。用浓盐酸调pH至1.0。配得好的溶液在其瓶壁上应形成似金属的光泽。

0.25%间胺黄溶液

间胺黄0.25克

去离子水100毫升

冰醋酸0.25毫升

1%酸酒精

70%酒精99毫升

浓盐酸1毫升

核固红溶液(见第15章)

4.步骤

(1)切片脱蜡至去离子水;

(2)酸酒精溶液漂洗3次;

(3)醛品红溶液(pH1.0)染30分钟;

(4)在酸酒精中漂洗去掉多余的染液;

(5)间胺黄溶液复染1分钟或至背景为淡黄色;

(6)去离子水漂洗2次;

(7)核固红溶液染细胞核1~3分钟;

(8)去离子水漂洗2次;

(9)95%酒精、纯酒精及二甲苯脱水透明,每步2次?熏每次2分钟;

(10)树脂封固。

5.结果

强酸性硫酸化黏液紫色

十、藏红O染色法

1.固定10%中性缓冲福尔马林。

2.切片石蜡,0.6微米。

3.试剂

铁苏木素(Welgert氏)工作液 (见第21章)

0.001%坚牢绿(FCF)溶液

坚牢绿(FCF.颜色指数42053) 0.1克

蒸馏水1000毫升

1%醋酸溶液

冰醋酸1毫升

蒸馏水99毫升

0.1%藏红O溶液

藏红O(颜色指数50240) 0.1克

蒸馏水100毫升

4.步骤

(1)脱蜡至水;

(2)Welgert氏铁苏木素溶液染7分钟;

(3)流水冲洗10分钟;

(4)坚牢绿(FCF)溶液染3分钟;

(5)1%醋酸溶液快速漂洗片刻,不超过10~15秒;

(6)0.1%藏红O溶液染5分钟;

(7)95%酒精、纯酒精及二甲苯脱水透明,每步2次,每次2分钟;

(8)树脂封固。

5.结果

核黑色

胞浆灰绿色

软骨、黏液、肥大细胞颗粒橙黄到红色

十一、淀粉样物质刚果红(Bennhold氏)染色法

1.固定10%中性缓冲福尔马林。

2.切片石蜡,6~12微米。

3.试剂

1%刚果红溶液

刚果红1克

蒸馏水100毫升

1%氢氧化钠溶液

氢氧化钠1克

蒸馏水100毫升

碱性酒精溶液

1%氢氧化钠溶液 1毫升

50%酒精溶液99毫升

Mayer氏苏木素溶液

4.步骤

(1)脱蜡至蒸馏水;

(2)用过滤的刚果红溶液染1小时;

(3)蒸馏水漂洗片刻;

(4)碱性酒精中快速分化;

(5)流水冲洗5分钟;

(6)Mayer氏苏木素溶液复染5分钟;

(7)流水冲洗15分钟;

(8)95%酒精、纯酒精脱水,二甲苯透明,各2次,每次2分钟;

(9)树脂封固。

5.结果

淀粉样物质粉红到红色,偏振光显微

镜下显苹果绿色双折光

核蓝色

怀疑淀粉样物质沉积症时,12微米的厚切片有助于显

示极少量的淀粉样物质沉积。

十二、淀粉样物质结晶紫(Lieb氏)染色法

1.固定10%中性缓冲福尔马林。

2.切片石蜡,4~6微米。

3.试剂

结晶紫贮存液

结晶紫14克

95%酒精 100毫升

结晶紫工作液

结晶紫贮存液10毫升

蒸馏水300毫升

浓盐酸1毫升

Apathy氏封固剂(见第15章)

4.步骤

(1)脱蜡至蒸馏水;

(2)结晶紫工作液染5小时;

(3)流水冲洗15分钟;

(4)含水封固剂,如Apathy氏封固剂或切片,空气干燥15分钟或更长,浸上二甲苯用树脂基质封固;

(5)立即观察,否则切片会褪色。

5.结果

淀粉样物质紫色

其他组织成分蓝色

十三、淀粉样物质Sirius红染色法

1.固定10%中性缓冲福尔马林。

2.切片石蜡,4~6微米。

3.溶液

1%氢氧化钠溶液

氢氧化钠1克

蒸馏水100毫升

碱性酒精溶液

80%酒精 100毫升

1.5%氢氧化钠溶液1毫升

Sirius红溶液

Sirius红,F3BA 100毫升

溶解后加

氯化钠0.5克

放置过夜后方可使用。勿过滤!

0.1M硼酸盐缓冲液,pH9.0

硼酸钠38.1克

蒸馏水1000毫升

Mayer氏苏木素溶液

4.步骤

(1)脱蜡至蒸馏水;

(2)流水洗5分钟;

(3)置于中性缓冲福尔马林溶液中过夜;

(4)流水冲洗15分钟;

(5)置于碱性酒精溶液中1小时;

(6)蒸馏水快速漂洗10秒钟;

(7)置于已预热到60℃的Sirius红溶液中,于60℃烤箱中放90分钟;

(8)硼酸盐缓冲液中快速漂洗2次;

(9)流水洗5分钟;

(10)Mayer氏苏木素溶液染5分钟;

(11)自来水流水冲洗15分钟;

(12)沥干切片上的水,快速经过纯酒精、二甲苯脱水透明,各2次;

(13)树脂封固。

5.结果

淀粉样物质及弹力纤维粉红到红色

核蓝色

背景不着色

植物纤维素(cellulose?雪,包括棉纤维 粉红到红色