(2)为了防止酶消化液干燥,可先在盒子底部加上数层湿滤纸,然后将玻棒放在其上。切片孵育时一定要加盒盖,以防止消化液干燥。
七、Mowry氏胶体铁染色法
1.固定10%中性缓冲福尔马林,勿用重铬酸盐固定剂。
2.切片石蜡,6微米。
3.试剂
2%三氯化铁溶液 (见第15章)
Mfiller氏胶体铁贮存液
蒸馏水250毫升
加热至沸腾,再加
29%三氯化铁溶液4.4毫升
三氯化铁应一滴一滴地加入,边加边搅拌,液体变成暗红色时,停止加热,冷却到室温,由于液体蒸发,应补加蒸馏水至250毫升。将此液包入透析纸内,放入5~10倍蒸馏水中透析19小时。4小时换一次蒸馏水,共换4~5次。用whatmanl号滤纸过滤2次,去除氧化铁粒。
滤后在室温下保存(溶液pH值保持在2~2.5之间,可保存2年)。
Mnllcr氏胶体铁工作液
Maller氏胶体铁贮存液 20毫升
蒸馏水15毫升
冰醋酸5毫升
12%醋酸溶液(见第15章)
5%亚铁氰化钾贮存液 (见第15章)
5%盐酸贮存液 (见第15章)
亚铁氰化钾盐酸工作液
亚铁氰化钾(5%储存液) 40毫升
盐酸(5%储存液) 40毫升
Van Gieson溶液或核固红溶液
4.步骤
(1)切片脱蜡至蒸馏水;
(2)12%醋酸溶液,3分钟;
(3)Maller氏胶体溶液1小时;
(4)12%醋酸溶液漂洗,4次,每次3分钟;
(5)亚铁氰化钾—盐酸工作液20分钟;
(6)自来水洗5分钟;
(7)蒸馏水中漂洗;
(8)Van Gieson溶液,复染5~7分钟,或核固红溶液5分钟;
(9) 95%酒精、纯酒精及二甲苯脱水透明,每步2次,每次2分钟;
(10)树脂封固。
5.结果
酸性黏多糖蓝色
八、胶体铁-PAS染色法
1.固定10%中性缓冲福尔马林。
2.切片石蜡,6微米。
3.试剂
29%三氯化铁溶液
Maller氏胶体铁贮存液20毫升
蒸馏水250毫升
加热至沸,再加入
29%三氯化铁溶液水4.4毫升
Mnllcr氏胶体铁工作液
Maller氏胶体铁贮存液20毫升
蒸馏水15毫升
冰醋酸5毫升
12%醋酸溶液(见第15章)
亚铁氰化钾—盐酸工作液
0.5%高碘酸溶液 (见第15章)
Coleman’s Schfff试剂
碱性品红1克
蒸馏水(加热到60℃)200毫升
加热,至沸点即刻停止,冷却后加偏亚硫酸氢钾2克
1摩尔盐酸10毫升
让其漂白24小时,然后加活性炭0.5克
振摇1分钟,然后用粗滤纸过滤。重复过滤至溶液无色为止。冰箱内贮存。
4.步骤
(1)脱蜡至蒸馏水;
(2)12%醋酸溶液,3分钟;
(3)Muller氏胶体铁工作液,1小时;
(4)12%醋酸溶液漂洗4次,每次3分钟;
(5)亚铁氰化钾—盐酸工作液,20分钟;
(6)流水洗5分钟后置于蒸馏水中;
(7)过碘酸溶液中氧化5分钟;
(8)蒸馏水漂洗3次;
(9)置于Coleman Sehlff试剂中10分钟;
(10)温流水洗5分钟;
(11)蒸馏水漂洗;
(12)95%酒精、纯酒精及二甲苯脱水透明,每步2次,每次2分钟;
(13)树脂封固。
5.结果
酸性黏液深蓝
中性黏液(含六碳糖)红至紫红
九、醛品红,pH1.0
1.固定10%中性缓冲福尔马林。
2.切片石蜡,6微米。
3.试剂
醛品红溶液
碱性品红1克
70%酒精200毫升
浓盐酸2毫升
三聚乙醛(仲醛)2毫升
室温放置2~5天至颜色呈深紫红色。该溶液pH为1.7。用浓盐酸调pH至1.0。配得好的溶液在其瓶壁上应形成似金属的光泽。
0.25%间胺黄溶液
间胺黄0.25克
去离子水100毫升
冰醋酸0.25毫升
1%酸酒精
70%酒精99毫升
浓盐酸1毫升
核固红溶液(见第15章)
4.步骤
(1)切片脱蜡至去离子水;
(2)酸酒精溶液漂洗3次;
(3)醛品红溶液(pH1.0)染30分钟;
(4)在酸酒精中漂洗去掉多余的染液;
(5)间胺黄溶液复染1分钟或至背景为淡黄色;
(6)去离子水漂洗2次;
(7)核固红溶液染细胞核1~3分钟;
(8)去离子水漂洗2次;
(9)95%酒精、纯酒精及二甲苯脱水透明,每步2次?熏每次2分钟;
(10)树脂封固。
5.结果
强酸性硫酸化黏液紫色
十、藏红O染色法
1.固定10%中性缓冲福尔马林。
2.切片石蜡,0.6微米。
3.试剂
铁苏木素(Welgert氏)工作液 (见第21章)
0.001%坚牢绿(FCF)溶液
坚牢绿(FCF.颜色指数42053) 0.1克
蒸馏水1000毫升
1%醋酸溶液
冰醋酸1毫升
蒸馏水99毫升
0.1%藏红O溶液
藏红O(颜色指数50240) 0.1克
蒸馏水100毫升
4.步骤
(1)脱蜡至水;
(2)Welgert氏铁苏木素溶液染7分钟;
(3)流水冲洗10分钟;
(4)坚牢绿(FCF)溶液染3分钟;
(5)1%醋酸溶液快速漂洗片刻,不超过10~15秒;
(6)0.1%藏红O溶液染5分钟;
(7)95%酒精、纯酒精及二甲苯脱水透明,每步2次,每次2分钟;
(8)树脂封固。
5.结果
核黑色
胞浆灰绿色
软骨、黏液、肥大细胞颗粒橙黄到红色
十一、淀粉样物质刚果红(Bennhold氏)染色法
1.固定10%中性缓冲福尔马林。
2.切片石蜡,6~12微米。
3.试剂
1%刚果红溶液
刚果红1克
蒸馏水100毫升
1%氢氧化钠溶液
氢氧化钠1克
蒸馏水100毫升
碱性酒精溶液
1%氢氧化钠溶液 1毫升
50%酒精溶液99毫升
Mayer氏苏木素溶液
4.步骤
(1)脱蜡至蒸馏水;
(2)用过滤的刚果红溶液染1小时;
(3)蒸馏水漂洗片刻;
(4)碱性酒精中快速分化;
(5)流水冲洗5分钟;
(6)Mayer氏苏木素溶液复染5分钟;
(7)流水冲洗15分钟;
(8)95%酒精、纯酒精脱水,二甲苯透明,各2次,每次2分钟;
(9)树脂封固。
5.结果
淀粉样物质粉红到红色,偏振光显微
镜下显苹果绿色双折光
核蓝色
怀疑淀粉样物质沉积症时,12微米的厚切片有助于显
示极少量的淀粉样物质沉积。
十二、淀粉样物质结晶紫(Lieb氏)染色法
1.固定10%中性缓冲福尔马林。
2.切片石蜡,4~6微米。
3.试剂
结晶紫贮存液
结晶紫14克
95%酒精 100毫升
结晶紫工作液
结晶紫贮存液10毫升
蒸馏水300毫升
浓盐酸1毫升
Apathy氏封固剂(见第15章)
4.步骤
(1)脱蜡至蒸馏水;
(2)结晶紫工作液染5小时;
(3)流水冲洗15分钟;
(4)含水封固剂,如Apathy氏封固剂或切片,空气干燥15分钟或更长,浸上二甲苯用树脂基质封固;
(5)立即观察,否则切片会褪色。
5.结果
淀粉样物质紫色
其他组织成分蓝色
十三、淀粉样物质Sirius红染色法
1.固定10%中性缓冲福尔马林。
2.切片石蜡,4~6微米。
3.溶液
1%氢氧化钠溶液
氢氧化钠1克
蒸馏水100毫升
碱性酒精溶液
80%酒精 100毫升
1.5%氢氧化钠溶液1毫升
Sirius红溶液
Sirius红,F3BA 100毫升
溶解后加
氯化钠0.5克
放置过夜后方可使用。勿过滤!
0.1M硼酸盐缓冲液,pH9.0
硼酸钠38.1克
蒸馏水1000毫升
Mayer氏苏木素溶液
4.步骤
(1)脱蜡至蒸馏水;
(2)流水洗5分钟;
(3)置于中性缓冲福尔马林溶液中过夜;
(4)流水冲洗15分钟;
(5)置于碱性酒精溶液中1小时;
(6)蒸馏水快速漂洗10秒钟;
(7)置于已预热到60℃的Sirius红溶液中,于60℃烤箱中放90分钟;
(8)硼酸盐缓冲液中快速漂洗2次;
(9)流水洗5分钟;
(10)Mayer氏苏木素溶液染5分钟;
(11)自来水流水冲洗15分钟;
(12)沥干切片上的水,快速经过纯酒精、二甲苯脱水透明,各2次;
(13)树脂封固。
5.结果
淀粉样物质及弹力纤维粉红到红色
核蓝色
背景不着色
植物纤维素(cellulose?雪,包括棉纤维 粉红到红色