分离后制得的杏鲍菇母种数量较少，需进行多代扩繁才能满足生产的需要。分离后直接转扩的母种叫一代母种，一代母种转扩后培育而成的母种叫二代母种。大面积生产时，母种的转扩不宜超过5代，否则可能引起菌种种性退化。
（1）挑选优质母种。无论从外地引进的母种或自己保存的菌种，母种菌丝要洁白、浓密，无杂菌感染，培养基不能失水萎缩。在冰箱中保存的母种要提前3天移出，在室温下使菌丝活化。
（2）制备试管培养基。按照制作母种培养基的要求和标准，将灭菌彻底、无污染、凝固好的培养基准备好。
（3）准备与消毒。将培养基试管、要转扩的母种以及接种所需用具放入接种箱中或净化工作台上。打开净化工作台杀菌灯和风机开关，30分钟后关掉杀菌灯，可开始转扩操作。接种箱内先打开紫外线杀菌灯，再用甲醛熏蒸消毒30分钟，然后关掉紫外线灯开始接种。
（4）母种的转扩。接种开始前，操作人员要用酒精棉球反复擦拭手和工具。点燃酒精灯，将接种工具的尖端部位在灯焰上灼烧至发红，冷却后再伸入到试管内进行母种的转接。先将要转扩的母种菌丝面用接种刀和接种钩刻划成小方块，试管内菌丝斜面的尖端部分培养基较薄，菌丝活力较弱，最好弃之不用。
挑取母种菌丝时，连带的培养基不要太厚，厚度一般在2毫米左右为宜。整个操作过程中试管的位置要始终在酒精灯火焰上方的无菌区。在净化工作台上转扩母种时，试管口要始终在灯焰的前方。母种的移接过程要准确、迅速，接种完毕迅速塞上棉塞。
（5）培育菌丝。1支母种可扩接30~50支试管，转接完毕后，10支试管捆成1把，用记号笔在试管上标明菌种名称及接种日期，倾斜30°角放入恒温培养箱中培育菌丝，控温在25℃，2天后即可见到菌种块上萌发新的菌丝，15天左右可长满试管。在菌丝生长期要勤观察菌丝生长情况，发现有杂菌及时拣出。培育好的母种直接转接原种，也可放入4℃左右温度下的冰箱中保存。