（1）科学叠袋。灭菌灶内的叠袋方式，应采取一行接一行， 自下而上排放，上下袋成一直线，前后叠的中间要留空隙， 使蒸汽可以自下而上畅通。不能堆叠成“品”字形，致使上 袋压在下袋的缝隙间，使蒸汽不能上下畅通，造成灭菌时局 部低温处灭菌不彻底。所以，叠袋时必须防止压住缝隙。
（2）温度达标。灭菌开始后，用大火猛烧，使温度迅速上升 到100℃，愈快愈好，如果上温慢，则一些高温杂菌会繁衍生 长，使培养料养分受到破坏。温度上升到100℃后，保持温度 12小时，中途不能停火，不能掺冷水，不能降温，使水始终 保持沸腾。
（3）认真操作。在灭菌过程中，要注意观察温度、水位，灭 菌灶内应装有温度计和水位计，以方便地观察温度和水位， 温度如果低了要立即加大火力，如果水位降低到一定程度， 应及时补充热水，防止烧干锅。灭菌开始后，应先打开灭菌 灶排气口，让灶内冷气排出，待水蒸气大量从排气口排出后 ，再关闭排气口。同时检查灭菌灶是否漏气。如果有漏气， 及时用湿棉花塞住，以免影响灭菌效果。
（4）卸袋。达到灭菌要求后，熄灭火力，让整个灭菌灶自然 降温后再打开。如果一下子打开灭菌灶，灶内热气喷出，灶 外冷气进入，一些装料太松或薄膜质量差的袋子，突然受冷 热温差刺激，可能膨胀破裂或冷却后密布皱纹，所以要在自 然降温至50℃以下时，方可卸袋。卸袋时为防蒸汽烫伤应戴 上手套，发现袋口松开或出现裂口，应立即用编织带扎住或 用胶布贴住。
（5）冷却。将灭菌袋搬入冷却室内，排列成“井”字形，待 袋内温度降到30℃以下，即手摸袋无热感时，方可开始接种 。准确测定：用棒形温度计插入袋料中观察温度，高于30℃ 应继续冷却。