行间穴的位置是足背侧，大拇趾、二趾缝之间的凹陷处，靠近大脚指边缘。取穴时，可将身体坐正，也可采用仰卧的方式。
行间穴可辅助治疗宿醉不适、夜尿症、遗尿、癃闭、腿抽筋、眼部疾病、肝脏疾病、月经过多、腹气上逆、肋间神经痛、粘膜炎等症、癫痫、头晕目眩、疝气等。
行间穴是足阙阴肝经上的重要穴位。通过了解它的位置，我们可以知道，这个穴位紧挨着大敦穴，因为二者所归属的经络是相同的，所以他们所主治的疾病也是基本相同的，因此，对于相同的疾病，也可以相互使用这两个穴位。
当然，由于穴位又是相对独立的，因此，行间穴也有其医治的疾病。
行间穴是火性穴位，擅长治疗头面之火。如：面赤胀痛，面热鼻血等。在按摩此穴的时候，眼睛会出现胀痛的感觉。
行间穴的主要作用就是泻火，若是经常出现两肋胀痛，并且伴随着嘴苦的症状，就是肝火过于旺盛。若是出现牙痛，口腔溃疡等症状，就是心火太盛的症状。这种时候按摩行间穴，就可以有效的消火。明代医书《类经·图翼》中说：“泻行间火而热自清，木气自下”。
三、行间穴还可以治疗心情烦躁、嗓子干哑、失眠多梦等病状。
四、因肝经环绕阴器，所以行间穴能够治疗生殖器官的疾病，如小便热痛、阴囊湿疹、阴部瘙痒等。