书城医学药理学实验方法
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第78章 降压物质检查法

一、定义

本法系比较组胺对照品(s)与供试品(T)引起麻醉猫血压下降的程度,以判断供试品中所含降压物质的限度是否符合规定。

二、仪器和用具

1.天平

精度:0.01g或0.1mg,1mg,100g。

2.手术器械

手术台、剪毛剪、手术剪、跟科直镊、跟科弯镊、止血镊、手术刀、气管插管、动脉夹及动、静脉插管。

3.血压记录装置

记录仪、汞柱血压计、压力传感器或多道生理记录仪。

4.实验用具

注射器、移液管、容量瓶、带塞小瓶、安瓿、测量尺、三通开关、脱脂棉、线绳。

5.试剂

氯化钠注射液、戊巴比妥钠、肝素钠等试剂。

三、溶液配制

1.5%戊巴比妥钠溶液

称取戊巴比妥钠适量,加永配成5%戊巴比妥钠溶液或用其他适当浓度的溶液。

2.生理氯化钠溶液

称取氧化钠适量,加水配成0.9%溶液。

3肝素钠溶液

称取肝素钠适量,乘以每毫克标示效价单位,得肝素总单位数,加生理氯化钠溶液配成200单位的溶液或用肝素钠注射液稀释成所需浓度。

4.对照品溶液

取磷酸组胺对照品,放置至室温。

割开对照品小管(注意勿使玻璃屑掉入),精密称取磷酸组胺适量,将称取的磷酸组胺毫克数乘以O.342(该数值应根据所用磷酸组胺对照品说明书中的数值为依据),换算成组胺的实际重量,加水将组胺溶解配成1.0mg/ml的对照品溶液,分装于安瓿中,封口,置4—8℃保存备用,溶液如无长霉变混浊,可在3个月内使用。

实验当日,取出对照品溶液,放置至室温。

割开安瓿,精密量取对照品适量,用生理氯化钠溶液配成10ug/ml的稀释液,再分别稀释成0.5、1,0、1.5ug/ml的组胺溶液(s),按照动物体重给药0.1ml/kg(剂量即为0.05、0.10、0.15ug/kg)。特殊情况可调整给药体积,但每千克动物体重给组胺的剂量不能改变。

5.供试品溶液

按《中国药典》品种项下规定的剂量,配成适当浓度的供试品溶液。实验时,要求供试品溶液与对照品稀释液的注入体积相等。

四、实验动物

健康、体重2kg以上的猫,雌雄均可,雌者无孕。

五、检定法

动物的麻醉和手术:

(1)将动物称重。用注射器吸取5%戊巴比妥钠溶液(1ml/kg左右)腹腔注射麻醉动物。也可用其他麻醉药品麻醉动物。

(2)动物麻醉后,仰卧固定在手术台上(保持动物体温),用手术剪沿颈部正中线剪开皮肤,分离出气管并切口,必要时插入气管插管接人工呼吸机。

(3)分离一侧颈动脉,剥离附着的脂肪组织和神经,并在动脉底下穿两根线,一线靠远心端将动脉结扎,近心端用动脉夹夹住。

(4)分离一侧股静脉。

六、测压装置和记录仪的调节

以压力传感器和记录仪法操作步骤来说明。

(1)将汞柱血压计、动脉插管、压力传感器与记录仪连接好。

(2)用生理氯化钠溶液将压力传感器、汞柱血压计和动脉插管中的空气排尽(每个连接处必须牢固,不漏水,如漏水会影响血压值的测定)。

(3)接通记录仪的电源。

(4)用生理氯化钠溶液加压,将球型汞柱血压计液面升高到13.3kPa(100mmHg),调节记录仪笔的振幅为合适的高度;将球型汞柱血压计液面回到O时,记录笔也相应回到零点基线,反复数趺使调节稳定,这样血压记录值已经校正完毕,此时将压力传感器与球型汞柱血压计的连通关闭,然后关上记录笔。

(5)在颈动脉上翦一小口,插入动脉插管(插管中应无气泡,管中应充满肝素钠溶液)并用另一线结扎固定插管与动脉,使插管和动脉处在自然状态下,避免使动脉扭曲,影响血压值的正常测量。

(6)打开动脉夹、接通动脉血压,从插管上的三通中注入200U/ml肝素溶液0.4ml左右,以防血液凝固堵塞插管影响血压测定。

(7)用生理氯化钠溶液将静脉插管中的空气排尽,在股静脉上插入静脉插管(或用头皮针),固定插管,同时注射适量肝素溶液抗凝(不超过200U肝素),给药用。

(8)手术全部完毕后,用少许脱脂棉蘸牛理氧化钠溶液后覆盖在动、静脉插管处。

(9)正常血压值的测定接通记录笔,走纸记录正常血压。

七、动物灵敏度的测定

(1)使记录仪缓慢走纸,按动物体重从静脉插管中注入对照品稀释液0.5ug/ml(0.1ml/kg)立即注入适宜体积的生理氧化钠溶液,将药液冲入体内,记录血压下降曲线。

(2)当血压回升恢复到基线时,先快速走纸一段,然后使记录仪慢速走纸,注入第二针对照品稀释液1.0ug/ml(0.1ml/kg)立即注入适宜体积的生理氯化钠溶液,将药液冲入体内,记录血压下降曲线。

(3)血压恢复正常值后,先快速走纸一段,然后使记录仪慢速走纸,注入第三针对照品稀释液1.5ug/ml(0.1ml/kg)立即注入适宜体积的生理氧化钠溶液,将药液冲人体内,记录血压下降曲线。

(4)重复给药2次。

(5)如0.10ug/kg剂量所致的血压下降值均不小于2.67kPa(20mmHg),同时相应各剂量所致反应的平均值有差异,可认为该动物的灵敏度符合规定。

(6)灵敏度测定和绘药时,相邻两次给要的间隔时间一致,每次给药应在前一次反应恢复稳定以后进行。

八、给药

(1)给药按ds、di、dt ds顺序。给药前记录仪慢速走纸,按0.10ug/kg对照品稀释液剂量(ds)经静脉插管给动物注入,并立即用适宜体积的生理氯化钠溶液,将药液冲人体内,记录血压下降曲线。

(2)供试品按药典品种项下规定的剂量(dt)给药,方法同ds,给药后记录血压曲线。

(3)同上进行dt的第一二次给药,记录血压下降曲线。

(4)间上进行ds的第二次给药,记录血压下降曲线。

九、结果判定

(1)测量每个剂量降低血压的幅度mmHg或换算成kPa单位。

(2)以第一与第三、第二与第四剂量所致的反应分别比较。

(3)如dt所致的反应值不大于ds所致的反应值的一半,即认为供试品的降压物质检查符合规定,否则应按上述次序继续注射1组4个剂量,并接相同方法分别比较两组内各对ds、dt剂量所致的反应,如dt所致的反应值均不大于ds所致的反应值,仍认为供试品的降压物质检查符合规定。

(4)如dt所致的反应值均大于ds所致的反应值,即认为供试品的降压物质检查不符合规定。否则应另取动物复试,如复试的结果仍有dt所致的反应值均大于ds所致的反应值,即认为供试品的降压物质检查不符合规定。

十、注意事项

(1)如需在同一只动物上测定多个样品时,需再经灵敏度检查,如仍符合对定,方可进行实验,以此类推。

(2)动物的麻醉根据实验室的经验可单用戊巴比妥钠溶液40~55mg/(ml.kg)腹腔注射麻醉,也可用其他适宜的麻醉剂进行麻醉。

(3)在实验过程中,可用恒温手术台或用手术灯照明给动物保温,以便使动物的血压稳定。

(4)如果将动物气管切口时,注意清除气管中的血液凝块(一般用脱脂棉),以防动物呼吸困难,影响血压稳定。