母种是菌种生产的基础。在母种接种中无菌操作是最基本的技术，一定要经过严格的技术训练，掌握熟练的技能和技巧。因此，在母种接种时应注意以下事项：
（1）牢固树立无菌概念。接种前严格消毒，在操作过程中，要求细心、快速、轻巧，不与人交谈和咳嗽等。
（2）酒精灯火焰要高。影响酒精灯火力大小的因素，主要是酒精浓度和灯心质量。要求酒精浓度要高，最好使用95％的工业酒精，酒精浓度越高，燃烧越好；使用的灯心最好用棉花捻制，并拔出适当的长度，内吸的酒精多，火焰旺盛，否则，灯心材料太实，塞得又紧，火力不旺。
（3）母种试管表面和管口要消毒彻底。在母种培养和贮存中试管表面一直处于自然有菌状态，试管口棉塞处更易藏微生物，也是接种操作中取种的必经之路，因此，一定要用酒精棉球擦拭和火焰灼烧灭菌，以防污染。
（4）拔棉塞、取种、接种及塞棉塞必须在火焰上方操作。酒精灯火焰周围的很小范围内的空间才是绝对无菌的，因此，拔棉塞、取种等一系列操作必须在火焰上方完成，不能偏离。
（5）接种钩一定要灼烧彻底。接种钩一定要灼烧至红色，凡是进入试管内的接种钩部分都应在火焰上旋转反复灼烧3～5次。
（6）接种钩灼烧后要冷却。灼热的接种钩不经冷却，直接用来钩取菌种，一是容易烫死菌种，二是菌丝容易粘在钩上，使接种困难。冷却一般是在菌种管的内壁上接触冷却。
（7）严格无菌操作。接种时不慎着火燃烧，应用手紧握，让其缺氧熄灭，顺势插入管内。绝不能用嘴吹熄，否则易引起空气污染。接种时掉到地面上的棉塞不能再用，一旦掉到台面上，塞之前要在火焰上过一遍再使用。
（8）接种后及时清理。每次操作完毕，应整理、清扫、拖洗，保持操作场所整齐卫生。