（1）溶液配置。先将马铃薯洗净去皮，称取200克。切成1厘米3左右的小方块或薄片，加水1000毫升，水沸后文火保持20分钟，而后用4层纱布过滤，滤液补水至1000毫升；称取20克琼脂，加入营养液中，继续加热至沸腾，用竹筷或玻璃棒不断搅拌，直至琼脂全部溶化；再称取20克葡萄糖，加入营养液中，搅拌溶解后，趁热分装使用。
（2）分装与塞棉塞。培养基要趁热装到试管中。试管一般采用20毫米×200毫米口径的试管。分装试管的装置可以用带环铁支架和玻璃漏斗，或1000毫升分装搪瓷缸。用漏斗支架分装时，先将培养基倒入漏斗内，再将橡皮管放在玻璃试管内，用手将弹簧夹打开，让培养基顺橡皮管流入玻璃管内。装入量为试管总长的1／4，不宜过多，然后关闭弹簧夹，取出橡皮管。装管时应防止培养基沾在试管口上。如已沾上，应用干纱布擦拭干净后，再塞上棉塞。棉塞要求松紧适中，棉塞头圆而滑，而且与试管壁紧密衔接，棉塞约长3厘米，2／3插入管内，1／3露出管口之外，外露部分应稍大些，整齐硬头，便于握取。
（3）培养基灭菌。培养基的灭菌一般采用高压灭菌法。培养基装好试管后，应立即灭菌，防止杂菌生长。即将试管10～20支扎成一捆，棉塞端包扎塑料薄膜，防止灭菌时冷凝水湿润棉塞。在锅内加足水，再将包扎好的试管直立放入灭菌锅的内桶中，加热、放气，当压力达到0.147兆帕时，保持30～40分钟，停止加热，结束灭菌。然后稍微开启放气阀门，缓慢放掉锅内气体，或让压力自行下降到零。但切勿放气过多，否则会使培养基液喷出来打湿棉塞，严重时棉塞也会被冲掉。当锅内气体排除完后，打开锅盖，去掉覆盖的纸或塑料薄膜，锅盖放回锅上，并留一条缝隙，以便利用锅内余热将棉塞表面的水分烘干。
（4）斜面培养基制作待培养基温度下降至60℃左右时，取出试管，制作斜面培养基。制作方法可以是整捆放在斜面板上，也可灭菌后趁热排放，即先取一根厚为1厘米、宽约4厘米的长木条，放在平整的桌面上，以此木条为枕，将试管上端靠在木条上，试管即成倾斜放置，试管培养基的液而也就会相应倾斜，边放置边调整培养基斜面的高度，以斜面刚到达试管的底部，其长度为试管长度的3／4左右，斜面上端距棉塞2～3厘米远为宜（如图8）。试管放置好后，在培养基未凝固之前，不要移动试管，以免使斜面变形。
图8配制试管斜面培养基
1.分装2.塞棉塞3.包扎成束4.高压灭菌5.摆斜面