母种接种是将母种转接至母种（试管）培养基的过程，俗转管或斜面接种（如图11）。接种前，把培养基放入接种箱中进行消毒，消毒要求按前述进行（使用超净上作台先预热30分钟）。接种时，手和接种针用浓度为75％的酒精棉球或纱布揩擦，点燃酒精灯，使火焰周围空间形成无菌区，左手平行并排拿起母种试管和供接种用的斜面试管，两支试管斜面要向上，管口要齐平。
图11母种转接过程示意图
右手大拇指和食指持接种针，在酒精火焰上灼烧灭菌。将左手试管移至火焰旁，用右手的小指、无名指和手掌，在火焰旁分别取下两试管的棉塞，将试管口在火焰上稍微烤一下，以杀灭管口上的杂菌，随后将试管口移至距火焰1～2厘米处，用冷却了的接种针将母种纵横切割成许多小方块，然后挑取一小块（接种块要带上薄薄的一层培养基，约绿豆大小），迅速移入被接的试管斜面的中前部，轻轻抽出接种针，再烤一下试管口，迅速塞上过了火焰的棉塞，如此连续操作，一支母种一般可扩接试管20～25支。
接种技术要点：整个操作过程均须在火焰旁进行无菌操作，母种上的接种块以及周边已老化的菌丝块不能移接扩管，要尽量挑选菌龄短的菌丝块进行生产。
在每支接好种的试管正面的上方贴上标签，写明菌种编号、接种日期，在每支试管的棉塞部分包上牛皮纸或报纸，随后把试管置培养箱（室）中在24℃～28℃下培养，每天检查有无杂菌感染及菌丝生长情况，发现杂菌及生长不良的试管要及时清除，经7～10天菌丝长满整个斜面后即可使用。