一、选材及灭菌外
植体的选择:在生长健壮、无病虫害的酸梅母株上选取当年生长的半木质化新梢或新梢上的芽点。
外植体的消毒:取半木质化的新梢,剪掉叶片,饱和洗衣粉水刷洗,然后用自来水冲洗2h,在超净工作台上,将其放入广口瓶中,先用70%酒精表面消毒1min,再用0.1%氯化汞溶液消毒8min,消毒处理时需不断振荡广口瓶,之后用无菌水冲洗5次~6次后备用。
二、诱导与分化培养
在超净工作台上将消毒处理之后的外植体接种在准备好的外植体诱导培养基中,培养条件控制在温度23℃±2℃,光照时间14h/d~16h/d,光照强度120μmol·m-2·s-1~200μmol·m-2·s-1,继代周期28d。
诱导培养基:MS+6-BA0.3mg/L+IAA0.6mg/L+LH100mg/L
分化培养基:MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.2mg/L+GA31.0mg/L+LH300mg/L
(以上培养基如无特别说明,则蔗糖浓度为3%,琼脂浓度为0.6%,pH值6.0。)
三、生根培养
当不定芽长至2cm~3cm时,将其转入生根培养基中进行生根培养,其培养条件控制在温度23℃±2℃,光照时间14h/d~16h/d,光照强度120μmol·m-2·s-1~200μmol·m-2·s-1,生根培养基如下:1/2MS+IBA0.8mg/L+NAA0.1mg/L+根皮苷5mg/L(以上培养基如无特别说明,则蔗糖浓度为3%,琼脂浓度为0.6%,pH值6.0)。
四、试管苗移栽
当试管苗长至2.5cm~3.5cm,叶片数6片~8片,节间3节~4节时,将根系良好的试管苗打开瓶口,在温室内炼苗7d~10d,注意保湿,逐步使试管苗适应温室环境,以防萎蔫。当叶片油亮时出瓶移栽。方法是:小心洗去培养基,栽植于沙床上,相对湿度保持在75%~80%,温度控制在20℃±2℃,当叶片转绿增大,出现1片~2片新叶,并长出白色侧根时,移入营养钵或苗床,营养土为草炭∶蛭石∶珍珠岩=5∶3∶2。注意保湿,每7d喷洒500倍多菌灵溶液,每隔2周浇灌1次0.5%的硫酸亚铁溶液或叶面喷施0.2%磷酸二氢钾。
【思考题】
1.怎样设计酸梅分化培养中的培养基生长素及细胞分裂素类型及浓度?
2.木本植物生根培养中的主要观察指标有哪些?
3.植物组培过程中生根苗生根形态有哪几种?酸梅属于哪种类型?