确定母牛是否妊娠，通常根据母牛外表和内部发生的一系列变化和特征，进行诊断。常用以下几种方法。
（1）外部观察法。①不再发情。在一般情况下，如果掌握每头牛，如了解受精母牛的发情规律，下一个发情期不再发情，大体上可断定该牛已妊娠。②食欲增加，安静温顺。受精母牛食欲增加，被毛逐渐光亮，性格趋于安静温顺，行动迟缓，避免角斗或追逐，群体活动时常落在后边。③腹围增大，乳房膨大。受精母牛乳房变大，腹围增大，甚至能摸到胎儿或感到胎动。初孕牛妊娠约3个月乳房开始膨大；经产牛妊娠中期以后乳房明显增大。④看“眼线”。母牛受精后20天，已受孕的，在眼球瞳孔正上方巩膜表面，有细面清晰纵向血管1～2条，呈直线状态，少数有分枝或弯曲，颜色鲜红，此法检查早期妊娠准确率在90％以上。
（2）阴道检查法。母牛受精后一个月，将开腔器插入阴道，如干涩阻力明显，黏膜苍白、无光泽，子宫颈口偏向一侧，为灰暗浓稠的黏液所封固，呈闭锁状态，可判定母牛已妊娠。
（3）直肠检查法。这是在生产中被广泛采用，检查早期妊娠最为准确可靠的方法。一般在母牛受精后1个月进行检查。已妊娠母牛两侧子宫角不对称，孕角较空角稍大变粗，较空角松软，有液体波动感觉，最膨大处子宫壁变薄。用手轻轻按摩子宫时，会感到非孕角收缩力较强，而孕角无收缩力或轻微收缩。触摸孕角一侧卵巢可感到体积增大，表面呈蘑菇样凸起，中央有凹陷的妊娠黄体存在，而未孕角侧卵巢呈圆锥形，体积要小些。
（4）激素诊断法。母牛受精20天后，用10毫克已烯雌酚注射肌肉。受孕母牛没有发情表现，未受孕母牛第二天便表现明显发情。此法检查早期妊娠的准确率可达90％以上。
（5）碘酒法。母牛受孕后20～30天，取其尿液10毫升于试管中，然后滴入7％碘酒溶液2毫升，充分摇动，5～6分钟后对亮处观察试管中尿液颜色的变化，已受孕母牛尿液颜色呈暗紫色，未受孕母牛尿液不变色或稍带碘酒色。