第一节常用器械的准备
兽医微生物检验所用的器械种类甚多(如吸管、试管、三角瓶、烧杯、培养皿、培养瓶、毛细吸管、玻片、盖玻片、橡皮塞、橡胶管、刀、剪、镊等),在选购时注意各种规格和质量,一般应能耐受多次高热灭菌。这些器皿在使用前都要根据不同的情况,经过一定的处理,洗刷干净。有的还要进行包装,经过灭菌等准备就绪后,才能使用。现将常用器械的准备和灭菌列述如下。
一、玻璃器皿的准备
1.新购的玻璃器皿,新购玻璃器皿常附有游离碱质,不可直接使用,应先除去包装沾染的污垢后,用热肥皂水刷洗,流水冲净,再浸泡于1~2%的工业盐酸中数小时,使游离的碱性物质除去,再以流水冲净。对容量较大的器皿,如大烧瓶、量筒等,洗净后注入浓盐酸少许,转动容器使其内部表面均沾有盐酸,数分钟后倾去盐酸,再以流水冲净,倒置于洗涤架上将水空干,即可使用。
2.用过的玻璃器皿凡确无病原菌或未被带菌物污染的器皿,使用后可随时冲洗,吸取过化学试剂的吸管,可先浸泡于清水中,待到一定数量后再集中进行清洗。有可能被病原菌污染的器皿,必须经过适当消毒后,将污垢除去,用皂液洗刷,再用流水冲洗干净。若用皂液未能洗净的器皿,可用洗液浸泡适当时间后再用清水洗净。洗液的主要成份是重铬酸钾和浓流酸,其作用是将有机物氧化成可溶性物质,以便冲洗。洗液有很强的腐蚀作用,使用时应特别小心,避免溅到衣服、身体和其他物品上。
2.1平皿、试管、烧杯、三角瓶、注射器、组织培养瓶等:可用高压灭菌器灭菌(0.105MPa即121℃20~30min)。
2.2吸管、载玻片、盖玻片等:可浸泡于5%石炭酸、2%~3%来苏儿或0.1%升汞中48h。浸泡吸管的玻璃筒底部应垫以棉花,以防投入吸管时管尖破裂。玻片和滴管也可用2%~5%碳酸钠煮沸消毒5~l0min,煮沸后用清水冲洗干净,拭干,保存或浸泡于95%酒精中以备使用。
2.3盛有固体培养基(如琼脂)或沾有油脂(如液体石蜡或凡士林等)的玻璃器皿:应于消毒后,趁热将内容物倒净,用温水冲洗,再以5%肥皂水或其他洗涤剂溶液煮沸5min,然后以清水冲洗。
3.云雾状玻璃器皿的处理凡玻璃器皿上有云雾状而不能用普通方法洗净者,可用清洁液处理。
3.1清洁液的配制法:取重铬酸钾l0g溶于常温清水63ml中,配成重铬酸钾饱和溶液,再吸取此液35ml加入粗质浓硫酸1000ml中即成。
3.2处理:将有云雾状的玻璃器皿浸泡于清洁液24h,然后取出用清水冲洗。若仍洗不净者弃之。清洁液可重复应用多次,直至其颜色变为蓝绿色或黑色为止。
4.玻璃器皿的洗涤欲洗去玻璃器皿上的油脂和污垢,其步骤如下:
4.1一般玻璃器皿
4.1.1将处理过的玻璃器皿浸泡于水中,用毛刷或试管刷擦上洗涤剂或肥皂,刷去油脂和污垢,然后用自来水或清水冲洗数次,最后用蒸馏水冲洗。
4.1.2经清水冲洗后,如发现玻璃器皿上尚有油迹仍未洗干净时,可置于2%~5%碳酸钠溶液或5%肥皂水中煮沸30min,再用毛刷刷去油脂和污垢,最后用清水或蒸馏水冲洗干净。
4.2吸管洗涤不易,需要小心,绝不能粗鲁急躁,其洗涤步骤如下:
4.2.1将吸管从消毒剂中取出后,先用细铁丝取出管口的棉塞,若棉塞太紧不易取出时,可将铁丝尖端压扁,插入棉塞与管壁之间。轻轻一转即可将棉塞拉出。
4.2.2将吸管浸泡于5%热肥皂水中,用纱布或棉花少许缠于细铁丝尖端上,以刷洗管内的油脂和污垢。铁丝尖端的纱布或棉花应随时更换。
4.2.3用洗洁球一吸一挤反复冲洗数次,然后用清水和蒸馏水反复冲洗数次,倒立于垫有纱布的金属丝篓或干净的搪瓷盆中干燥。
5.玻璃器皿的干燥洗净的玻璃器皿通常倒插于干燥架上,令其自然干燥,必要时可放于温箱或50℃左右干燥箱中,以加速其干燥,但温度不宜太高,以免玻璃器皿破裂。干燥后以干净的纱布或毛巾拭去干后的水迹。
6.玻璃器皿的包装
6.1棉塞的制作:依试管口和瓶口的大小,取适量棉花卷成圆锥形棉塞,或用纱布包裹棉花制成棉塞。如直接用棉花作棉塞时,要选择纤维长的新棉花,不能用脱脂棉,制作时将棉花分成数层,互相重叠,折叠卷紧,制成长约4~5cm的圆锥形棉塞。如用纱布包裹棉塞时,也可选用脱脂棉,制作时将纱布放于试管口和瓶口上,用适量棉花塞人纱布中,制成长约4~5cm的圆锥形棉塞,然后用纱布包好,用线绳扎紧即可。
6.2试管的包装:将试管口塞上棉塞,以8~10支为一捆,用棉线在试管的中部捆扎,再用一张牛皮纸或报纸将整捆试管的棉塞端包好,纸外捆以棉线即成。
6.3吸管的包装:先用细铁丝或长针头在吸管口端塞入少许棉花(塞入的棉花应大小适宜,太小则松,吹吸时随气流上下移动而失去作用;太大则紧,阻塞气流而吹吸不便)然后用报纸条从尖端开始斜向卷曲缠绕包裹,口端多余的纸筒折向前,再以10支为一捆,用报纸或牛皮纸包起,外捆以棉线,置于铝制消毒筒内消毒。
6.4平皿的包装:相同大小的平皿,以4~6个为一捆,底朝上盖朝下叠成圆柱状,然后用报纸或牛皮卷包裹.
6.5组织培养瓶和青霉素瓶的包装:单个或数个一包,用报纸或牛皮纸包裹,外捆以棉线即可。
6.6锥形瓶和烧杯的包装:锥形瓶塞上棉塞后,用报纸逐个包扎或不用纸包扎。烧杯或锥形瓶可直接用报纸逐个包扎。
6.7注射器的包装:将注射器分开,用纱布包裹,然后用报纸或牛皮纸包裹。
7.玻璃器皿的消毒包扎好的玻璃器皿用前进行干热灭菌(160℃~180℃,1~2h)或高压灭菌(0.105Mpa即121℃20~30min)。
二、细胞培养用的玻璃器皿的准备
1.清冼无论新购买的或用过的玻璃器皿,都必须浸泡于粗硫酸或清洁液中过夜,次日取出用自来水浸泡4~6h后,用自来水冲冼10次以上或用流水冲冼5min以上,最后用蒸馏水或双蒸馏水冲洗6次或3次,在温箱中干燥后即可包装。
2.包装包装方法基本同一般玻璃器皿。细胞培养瓶可用软木塞塞上,外包以牛皮纸;青霉素瓶可直接放入消毒盒内消毒。
3.消毒包装好的玻璃器皿,均以干热灭菌(160℃,1~2h)。消毒过的器皿,必须在1周内用完,过期应重新消毒。
三、橡胶制品的准备
橡胶制品如橡皮塞、胶头滴管、洗洁球、橡胶管等一般经肥皂水煮沸20min后,流水冲洗10次,再以蒸馏水冲洗2次后,用双蒸馏水浸泡于玻璃缸中备用。使用前煮沸消毒15min,也可取出晾干包装高压灭菌消毒后使用。
四、金属用具的准备
刀、剪、镊子等金属用具使用后,应用肥皂、清水洗净擦干,防止生锈。刀、剪、镊子等金属用具使用前浸在95%酒精内,用时取出经过火焰,待器械上酒精自行燃烧完毕即可使用(注意:防止烧伤手或燃烧盛有酒精的玻璃缸)。器械上如有动物组织碎屑,应先在5%石炭酸中洗去碎屑,然后蘸酒精燃烧灭菌。
第二节实验室功能划分与仪器设备的配置
诊断检测实验是涉及多学科的一项综合性工作,根据检测目的不同,可能需要进行细菌学、病毒学、免疫学、分子生物学、生物化学等各方面的工作。因而,诊断检测实验室应至少设有:病理学诊断室、血清学诊断室、病原学诊断室和分子生物学诊断室。如有条件,还可将上述实验室进一步细化,如将病原学实验室分为细菌学诊断室、病毒学诊断室、寄生虫学诊断室等。同时,应设立相对独立的共用仪器室,以利于共用仪器的使用与管理。另外,应设相对独立的业务接待室和样品处理室,专门负责外来病例、样品的登记、处理、保存与管理等。
诊断室应按照其工作领域、诊断功能来配置仪器。在选用仪器时,应根据实际工作的需要,在充分了解其同类产品的性能和特点后加以选定;有的产品,除主要部件外,还有系列的配件和附件,以充分发挥其功能或扩展其功能。如一台功能齐全的倒置显微镜,它可包括普通光源功能、相差功能、恒温功能、显微拍照功能和显微摄像功能等;再比如离心机应有足够转头。在购置仪器时,一方面应考虑有足够的配件,否则会降低仪器性能。另一方面从经济角度考虑不应盲目地求全,而应有目的地选择。有的仪器自动化程度比较高,操作方便,但价格昂贵,可根据实验室的工作量来确定。若工作量不饱和,应适当选用自动化程度稍低但能达到检验目的的产品。有的大型仪器利用率很低,而在社会上可以有偿使用的,则不提倡购置,以免投入不必要的维护管理成本。
除各室必备的加样器(移液器)、冰箱(柜)及各种易耗品外,各诊断室配备的主要仪器设备如下:
病理学诊断室应配备的主要仪器有:石蜡切片机、冷冻切片机、磨刀机、显微镜(带荧光功能)等。
血清学诊断室应配备的主要仪器有:酶标仪(酶联检测仪)、酸度计、洗板机、台式高速冷冻离心机、培养箱(生化型)、微量振荡器、多道加样器、旋涡混合器等。
病原学诊断室应配备的主要仪器有:恒温培养箱、CO2培养箱、普通生物显微镜、倒置显微镜、超净工作台、酸度计、离心机、旋涡混合器、超声裂解仪等。
分子生物学诊断室应配备的主要仪器有:PCR仪、电泳仪、超净工作台、离心机、紫外透射仪。有条件还可配置凝胶成像分析系统等。
共用仪器室应配备的主要仪器有:纯水机、电子天平、制冰机、超高速离心机、分光光度计等。
洗涤消毒室应配备的主要仪器有:高压灭菌锅、电热鼓风干燥箱、超声波清洗机等。
第三节实验仪器设备的管理
实验仪器是完成各项检验工作必备的基本条件之一,其运行的精确度、稳定性和安全性直接影响实验能否正常进行和结果的准确性及重复性。
在选用仪器时,应根据实际工作的需要,在充分了解其同类产品的性能和特点后加以选定;有的产品,除主要部件外,还有系列的配件和附件,以充分发挥其功能或扩展其功能。如一台功能齐全的倒置显微镜,它可包括普通学源功能、相差功能、恒温培养功能、显微拍照功能和显微摄像功能等,在购置仪器,一方面应考虑有足够的配件,否则会降低仪器的性能。如离心机应有足够的转头;另一方面从经济角度考虑不应盲目地求全,而应有目的地选择。有的仪器自动化程度比较高,操作方便,但价格昂贵,可根据实验室的工作量来确定。若工作量不饱和,应适当选用自动化程度稍低但能达到检验目的的产品。
实验仪器根据其精密程度和价格昂贵与否,通常大致分为贵重仪器和一般仪器。重要大型仪器要求重点管理;贵重仪器应放置在洁净、防尘、防潮的环境中使用;一般仪器可放置在要求不太严格的环境中。
超速和高速离心机、高级显微镜、液相及气相色谱仪等存放的相对湿度不应高于60%,使用电压应稳定在220-240V之间。由于我国城市普遍存在电压波动幅度大的问题,此类仪器本身对电压的自调能力有限,所以,应根据说明书的要求配备稳压电源。稳压电源的输出电流应与仪器相符或略高。
冰箱不能摆在受阳光直接照射的地方,其周边应留有供空气充分流动的空间,以利于散热;高压消毒器、蒸馏水器应与其他仪器分开放置和使用,以免在使用时排出的水气损害这些仪器的原件。
实验仪器应有定期维护和维护的措施,以保证其正常运行。超净工作台每年至少应检测一次,项目包括风力、气流、无菌程度;超高速离心机应定期作干燥运转和检查真空泵油是否出现云雾状。其他生化仪器,都应按说明书的要求进行维护。仪器使用后应及时清理和还原,不能留在下次使用之前再清理。
仪器应由专业人员修理,无关的人员不得随意拆卸、置换仪器的零件或元件。实验仪器的管理最终要落实到制度上。一个有效、严格的管理制度,应包括以下几个方面:
1.贵重仪器管理责任到人,建立岗位责任制和挂牌上岗制
2.重要仪器应悬挂使用操作规程并附有简单故障排除办法
3.事故报告制度和损坏报修制度
4.重要仪器使用原始记录
5.各种仪器的定期维护制度、标明上次检修时间和检修期
6.仪器的调试核准制度
7.重要仪器建立档案管理
8.仪器报废确认制度
第四节主要实验仪器设备的使用与维护
一、光学显微镜
显微镜是人类认识物质微观世界的重要工具,是现代科学研究工作不可缺少的仪器之一。显微镜自1666年问世以来已有300多年的历史了,其间随着科学技术不断发展,显微镜的品种不断增加,结构和性能逐步得到完善和提高。
光学显微镜的分类:根据不同的使用用途,光学显微镜可分为普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜、倒置显微镜、体视显微镜、偏光显微镜、万能研究用显微镜等10多种,目前,世界上许多国家都可以生产光学显微镜,牌名、种类繁杂,其中德国、日本等国家制造的显微镜品质、数量占优势,但价格昂贵。