HE染色是适用性最广的常规染色方法。
常用的苏木素染色有Mayer氏苏木素和Harris氏苏木素染色法。前者适用于一般标本,只染核,切片在自来水中冲洗可加深核的染色。后者适用于骨组织(因脱钙会减弱核的嗜碱性),可染出核、胞浆、结缔组织等各种结构。
苏木素为一种天然染料,氧化后产生苏木因,苏木因是染色过程中真正起作用的物质。这一氧化过程称为成熟。苏木素配制好后,静置数日,即可自动成熟。如需立即使用,可加入氧化剂(如碘化钠等)促其成熟。
工作液的寿命长短不一,一般800毫升染液可染200张切片。
常规用伊红溶液复染。如用伊红—焰红溶液复染,可使切片中各种成分形成鲜明的颜色对比——胞浆呈粉红色,胶质和肌肉新鲜红色。
下面介绍Mayer氏苏木素溶液、Harris氏苏木素溶液的配制方法。伊红—焰红溶液的配制法见第十五章。
Mayer氏苏木素贮存液
钾明矾(或铵明矾) 50克
蒸馏水 1000毫升
苏木素(晶体) 1克
碘化钠 0.2克
(或2%碘化钠溶液)20毫升
柠檬酸 1克
水合氯醛 50克
配制法:明矾加入蒸馏水中,完全溶解后(可用磁力搅
拌器加速)加入苏木素,完全溶解后加入碘化钠,振摇10分钟,加柠檬酸,振摇10分钟,加水合氯醛,振摇至其完全溶解。
此时液体为深葡萄酒色,滴一滴在水中应立即变为蓝色。
Harris氏苏木素溶液
苏木素 5克
纯酒精 50毫升
钾明矾(或铵明矾) 100克
蒸馏水 1000毫升
氧化汞 2.5克
配制法: 蒸馏水注入2000毫升烧瓶中,加入明矾,搅拌加热促溶。另用一小烧瓶盛酒精,加入苏木素,室温下剧烈振摇促溶。大烧瓶内明矾完全溶解后将其从热搅拌器上取下。混合二液(缓慢!),迅速加热至沸腾(1分钟内)。取离热源,缓慢!加入氧化汞,加热至溶液呈深紫色。冷水中冷却。加20毫升冰醋酸可增强核染色。每次用时均需过滤。
一、Mayer氏苏木素—伊红染色法
1.固定10%中性缓冲福尔马林,Bouin氏液,Zenker氏液。
2.切片石蜡,3~8微米。
3.试剂Mayer氏苏木素溶液
伊红—焰红工作液(见第十五章)。
4.步骤
(1)脱蜡至蒸馏水;
(2)Mayer氏苏木素,15分钟;
(3)温热流水(自来水)冲洗,15分钟;
(4)蒸馏水洗;
(5)80%酒精,1~2分钟;
(6)伊红—焰红复染,2分种;
(7)脱水、透明:95%酒精、纯酒精和二甲苯,各2次,每次2分钟;
(8)树脂封固。
5.结果
核 蓝色
胞浆 粉红至红色
注意:含汞固定液(如Zenker氏液)固定的标本,须先去除汞沉淀再染色(见下文)。
二、Harris苏木素—伊红染色法
1.固定10%中性缓冲福尔马林,Bouln氏液,Zenker氏液。
2.切片石蜡、冰冻或火棉胶切片,3~20微米。
3.试剂
1%酸酒精(见第15章)
氨水(见笫15章)
伊红—焰红工作液(见第15章)
Harris氏苏木素溶液
4.步骤
(1)脱蜡至蒸馏水;
(2)Harris苏木素,6~15分钟;
(3)流水冲洗,2~5分钟;
(4)1%酸酒精分化(将切片浸入1~2次即可);
(5)自来水冲洗;
(6)稀氨水(或饱和碳酸锂溶液)至切片呈鲜蓝色;
(7)自来水充分冲洗,10分钟;
(8)80%酒精,1~2分钟;
(9)伊红—焰红复染,2分钟;
(10)脱水透明:95%酒精、纯酒精、二甲苯,各2次,每次2分钟;
(11)树脂封固。
5.结果
核 蓝色
胞浆 粉红至红色
注意:含汞固定液(如Zenker氏液)固定的组织,应在染色前先进行去汞处理(见下文)。
三、去除汞沉淀色素法
1.试剂
Gram氏碘液或Lugol氏碘液(见第15章)
5%硫代硫酸钠溶液(见第15章)
2.步骤
(1)脱蜡至蒸馏水;
(2)碘液,15分钟;
(3)自来水漂洗;
(4)5%硫代硫酸钠溶液,3分钟;
(5)自来水充分冲洗,10分钟。