一、溶液的百分比浓度
1.容积百分比浓度溶质是液态时,常用这种浓度,即每100毫升溶液中所含溶质的分量(用X%表示)。
例:配制100毫升1%氢氧化铵溶液。
100×1%=1(毫升)(需用浓氢氧化铵量)
配制法:加1毫升28%氢氧化铵于99毫升蒸馏水中。
2.重量百分比浓度用品体、粉剂等固态溶质配制液体时,常用这种浓度,表示每100毫升溶液中所含溶质的克数。
例:配制100毫升5%硫酸铵溶液。
100×5%=5(克)(所需硫酸铵的量)
配制法:称取5克硫酸铵,加入蒸馏水,至容积100毫升。
3.稀释浓度各种贮存液常需稀释为另一浓度的工作液。其通式为:
V1C1=V2C2
V1:所需贮存液的量(容积);
C1:贮存液浓度;
V2:欲配制的工作液的量(容积);
C2:工作液的浓度;
例:用12%火棉胶溶液配栅100毫升8%火棉胶溶液。
V1C1=V2C2
V1= V2C2/C1
C1=12%,V1=100,C2=8%
V1=100×8/12=66.7(毫升)
配制法:取66.7毫升12%火棉胶溶液,加入33.3毫升纯酒精乙醚。
注意:公式两侧的浓度和容量单位须一致。
4.用比率表示的稀释度
例:将Eosin贮存液稀释为1∶4的工作液100毫升。
100÷4=25(毫升)(稀释液分为四份,每份25毫升),其中,贮存液占一份=25毫升
80%酒精占三份=75毫升
配法:取25毫升贮存液加75毫升80%酒精。
二、染料纯度
不同厂家或同一厂家不同批号的产品,其纯度往往不一。为求得满意的染色效果,要按纯度调整染液中染料的含量。
例:一批染料纯度为80%,配制的染液每100毫升含1克染料时,效果满意。新批号染料纯度为70%。按同样浓度配制时,效果不佳如何调整?
(1)先求出校正率
校正率=原来染料纯度÷现在染料纯度
80÷70=1.14
(2)现在所需染料的量=原来染料所需的量×校正率
1(克)×1.14=1.14(克)
用新批号的染料配制染液时,按100毫升染液含1.14克染料配制,即可达到原来的效果。
三、摩尔浓度
每1000毫升溶剂中加入1摩尔(1克分子量)固体溶质形成的溶液,称为1摩尔(浓度)的溶液(1摩尔)。
例:配制1000毫升0.2摩尔的醋酸钠溶液。
醋酸钠分子量=136.1
分子量(克)×摩尔浓度×容积(升)=溶质量(克)
136.1×0.2×1=27.2(克)
配法:将27.2克醋酸钠加入适量蒸馏水中,使终容积为1000毫升。
当用液体溶质如某些酸、碱配制摩尔浓度溶液时,要利用由纯度和比重得出的稀释因子。
例:配制1000毫升1摩尔的盐酸。
HCl分子量=36.5
36.5×1×1=36.5(克)
盐酸比重为1.19,其纯度为37%(厂家提供)。
稀释因子=1.19×37%=0.44
所需盐酸的容积=36.5÷0.44=83(毫升)
配法:取83毫升盐酸缓慢加入917毫升蒸馏水中。
【附】银染色技术中玻璃器皿的清洁
某些银染色技术(如亲银染色,Masson-Fontana染色等)要求先用酸清洗玻璃器皿。推荐使用浓硝酸或铬酸盐—硫酸混合液,不宜用盐酸,因为如果清洗不净会形成氯化银沉淀。一般用酸处理30秒,自来水充分冲洗,蒸馏水漂洗数次即可。
六铵银染色法不需要事先酸洗容器,因染色过程中4%铬酸一小时实际上起到了清洁作用。不过应注意,染色时染缸内面须全部接触到铬酸液。
若使用一次性塑料容器替代玻璃器皿,则可省去酸洗的麻烦。
EDTA脱钙法
1.固定10%中性缓冲福尔马林。
2.试剂
0.2摩尔Tris缓冲液
三羟甲基氨基甲烷24.28克
蒸馏水1000毫升
EDTA脱钙液
0.2M Tris缓冲液 100毫升
乙二胺四乙酸二钠(EDTA) 10克
(用NaOH缓慢调整pH到7)
等渗固定液(每1000毫升)
氯化钠8.5克
蒸馏水900毫升
38%甲醛100毫升
弱酸脱钙液
等渗固定液850毫升
浓盐酸80毫升
甲酸70毫升
三氯化铝?觹60克
冰醋酸25毫升
按上述顺序加入,加到三氧化铝时应一边搅拌一边缓慢加入。以免突然产热过多。
3.步骤
(1)100%酒精内脱脂12小时;
(2)无水甲醇内脱脂12小时;
(3)水洗后进入EDTA脱钙液中7天;
(4)水洗后进入弱酸脱钙液内?熏从第3天起开始用前述化学方法或物理方法检查脱钙情况?熏直到良好脱钙为止。
注意:组织块较大时,应适当延长在EDTA液中时间。
组织脱水、包埋、制片同前法所述。