除蟾酥繁殖季节外，其他时节均可采收，最适宜的采收季节是立夏到秋分（5月初至9月底）这段时期。将捕捉来的蟾蜍用清水冲洗干净，待体表的水分干后即可进行蟾酥的采收。
（1）挤压法。采收蟾酥时，可用左手抓牢蟾蜍，让蟾蜍头部朝下，注意不可用力过大，以免把蟾蜍捏死。右手用竹制木夹钳（不可用铁器，以免蟾酥与铁作用后变质）在蟾蜍的耳后腺、背上疣疱及后腿处隆起的疣疱处削开其表皮，并适当用力挤压，将挤压出的白色浆液盛进瓦罐或玻璃容器中。
（2）刺激法。用蒜或辣椒等辛辣物质塞入蟾蜍口中，刺激它分泌液汁，将液汁挤压到容器里，将收集到的浆液先用80号铜筛筛第一次，再用120号铜筛筛第二次，然后在铜筛的背面刮下鲜浆，将鲜浆均匀地涂在玻璃板上，以一分钱硬币厚度为宜，晒干后轻轻撕下，叫“片酥”。或者将净浆放在模型上，晒到七八成干，取出，用手揉团块，称为“团酥”或“块酥”。
新鲜蟾酥的浆液以白净、浆粒微黄、油面发光、黏度大、拉力强者为质量最佳。团块状者质坚、不易折断、断面棕褐色、角质状、微有光泽为佳。片状者质脆易碎，断面红棕色，半透明，气微腥，以红棕色、断面角质状、半透明、有光泽者为佳。
采收蟾酥时，要注意以下几点：
（1）戴上口罩和手套，防止浆液溅入眼睛和鼻子。
（2）刮取蟾浆液的工具和容器禁用铁质，以免浆液变质。
（3）采浆后的蟾蜍要及时释放，但不可直接放入水中，最好放在干地上，以免伤口发炎，造成死亡。