制作母种培养基时应注意以下问题：
（1）要按配方准确称取各种配料，不要随意增减配料。
（2）分装培养基时，勿使培养基沾在试管口内壁，若已沾上 ，应用纱布揩干净，再塞好棉塞灭菌。气温低时，为避免培 养基凝固过快，可将盛装培养基的器皿放在盛有热水的盆或 桶内，利用水浴来保持培养基的温度。
（3）试管棉塞要用不易吸湿的未脱脂的原棉，棉塞要紧贴管 壁，不能起皱成沟。灭菌时棉塞不要弄湿，保持干燥；若弄 湿，应设法烘干。
（4）灭菌后摆成斜面，倾斜度要适中，要防止管口有冷凝水 发生，特别在气温低的环境下摆放斜面时，要特别注意。一 般可在试管上下铺垫和覆盖洁净的纱布或干毛巾，以减轻管 内外温差，减少冷凝水的发生。若已发生时，可将试管放入 25℃～30℃的室中，数日会逐渐蒸发消失。
（5）琼脂培养基若出现不能凝固成块或凝固性差的现象，主 要是因琼脂的用量不足或琼脂本身凝固性差。
此外，pH值偏低也会出现上述现象。这样应找出原因，重新 调整配制后再用。