使用接种箱时，应先开启玻璃窗，再用浸过消毒水后拧干的 毛巾将箱内揩擦干净，然后放入接种用品。箱内通常放入待 接种瓶（袋）或试管〔放入量只能占箱内面积的1／2，要留 下挪动菌瓶（袋）的位置〕、菌种、接种工具、酒精灯、火 柴、酒精棉球和消毒品及盛物。入箱完毕后，要检查所需物 品是否齐全无缺，然后进行箱内空间消毒灭菌。
灭菌有两种方法：一种是甲醛和高锰酸钾混合熏蒸。熏蒸时 ，先后向盛药皿内倒入甲醛或高锰酸钾，然后迅速关严玻璃 窗，让药物汽化密闭消毒。若有紫外线灯，可同时启动，提 高灭菌效果，时间可缩短到30分；若没有紫外线灯，应密封 40～45分。另一种是用气雾消毒剂熏蒸，其药效相当，用法 更简便，仅点燃消毒剂就行。若连续接种，以后每箱的灭菌 时间可控制在20～30分。实验证明，几种药物交替使用，灭 菌效果会更好。
灭菌后，打开操作孔门，双手经药物消毒后自袖套口伸进箱 内，用酒精棉球将双手、接种工具再次揩擦消毒。待酒精挥 发后，点燃酒精灯，先将接种工具灼烧灭菌，再拔去棉塞， 将试管口或瓶口用火焰烧一下。待接种工具冷却后，按无菌 操作要求进行接种。接种完毕，盖灭酒精灯，抽出双手，打 开玻璃窗，取出所盛物品，并将箱内清理干净，以便再次使 用。若暂不用时，要盖好玻璃窗及孔门，保持内外清洁，对 裂缝等不密封的地方要维修好，并放在干燥通风处备用。