（1）配制原种培养基。先将糖、石膏等易溶物质溶于水中，再将其他原料混合，连同所需水量一起加入搅拌机内拌匀，使料的含水量达到60％～65％，pH值达到7.5～8.5即可装瓶。
（2）菌种瓶的选择。生产原种多以玻璃瓶为主，要求无色透明，耐高温，瓶口大小适中，直径3厘米左右，通常采用750毫升容量的标准菌种瓶。
（3）装瓶。菌种瓶洗净控干后装入适量的培养料，棉籽壳或木屑培养料装至瓶肩处，用工具将料面压平压实，在中间用圆锥形捣木向下打洞，直通瓶底，有利发菌，然后将瓶口和外壁擦拭干净。用葡萄糖瓶装麦粒时，装量以瓶的1/2或2/3为宜，过多则灭菌后麦粒不易摇匀。装好料的菌种瓶用棉塞将瓶口塞紧，棉塞要求干燥、松紧适中，1/3露在瓶口外。
（4）灭菌。若采取高压蒸汽灭菌，可在0.15兆帕的压力下灭菌60~100分钟，棉籽壳及玉米芯料灭菌需60～80分钟，麦粒培养料灭菌则需100～150分钟。若采取常压蒸汽灭菌，当锅内温度达到100℃时，要保持8～12小时。制作麦粒菌种时，不宜采用常压灭菌方法。灭菌结束后从锅中取出菌种瓶，放在冷却室内冷却，准备接种。
（5）原种的扩接。接种前的准备和消毒可参考母种的转扩。点燃酒精灯，将接种工具在灯焰上灼烧，冷却后伸入母种试管内，将母种斜面划成4～5小块，斜面上端1厘米左右的薄菌丝一般弃之不用。
用左手握母种试管，右手拿接种工具，右手小手指和手掌拔掉棉塞，在酒精灯焰附近快速将母种块移入菌种瓶内，使母种块上培养基与瓶内料面接触，快速将棉塞在灯焰上过一下塞入瓶口。接种过程中尽量减少菌种瓶口暴露的时间，防止杂菌侵入。
（6）培育菌丝。接种完毕后，打开接种箱，移出接过种的原种瓶，在瓶壁贴上标有菌种名称、菌种级别、生产日期的标签，移入培养室培养。培养室要求干燥、黑暗、通风良好，温度在20℃~26℃。一般接种3天后母种块就会萌发，30~40天后可长满全瓶。培养期间要注意观察菌丝生长情况，发现杂菌要及时挑出。