用组织分离方法得到的母种或从外单位购回的母种,一般数 量很少,必须扩大培养才能满足生产需要。生产上一般都把 母种转管扩接成子代母种进行扩大培养。每支母种可扩接40 支左右再生母种,再生母种每支试管可转管扩接20支第二代 子代母种。生产上转管扩接一般不超过3次,经多次转管容易 削弱菌丝生活力,降低产量与质量。母种扩大培养操作过程 如下:
(1)要选用菌种。要求菌种必须纯洁、颜色纯正、健壮、无 老化。
(2)严格无菌操作,接种箱或接种室的地板、台面及接种工 具严格消毒灭菌,操作人员先用肥皂将双手洗净外,再用75 %酒精将手消毒,并换穿接种时专用工作服、鞋。
(3)接种箱内母种扩接具体操作如下(如图9):
一是开始接种时,首先点燃酒精灯,在火焰周围的无菌区内 接种;二是左手同时握住母种试管和待接斜面培养基试管。两管口 平齐并使试管内培养基斜面向上,呈水平状态;图9母种扩大培养
1.消毒2.接入菌种3.棉塞与管口消毒4.棉塞封口
三是右手拧松两试管棉塞,然后用执笔的方式握住接种钩, 用酒精灯火焰灭菌,先从钩端烧起,将所有可能会伸进试管 的钩体过火消毒;四是用右手小指、无名指拔出两试管棉塞,握在手中。左手 将试管口在火焰上缓慢转动,以杀死管口周围的杂菌,切记 不可将试管烧得过烫,以免将金福菇菌种也烧坏;五是将灭过菌的接种钩伸入母种试管内。先插入空白未长金 福菇菌丝的培养基内,以冷却接种钩,然后插入金福菇菌丝 部分,钩出麦粒大小的金福菇菌丝一块,迅速将其放入待接 试管培养基中央,然后轻轻地抽出接种钩,移动过程中接种 钩切记不可接触试管壁,同时,勿远离火焰周围的无菌区域 ;六是然后再缓缓转动试管口灭菌消毒,在火焰无菌区附近塞 入棉塞。如此重复操作接种,为避免转管次数过多而使菌丝 活力降低,转接第一,第二次试管斜面时要尽量多接一些母 种;七是恒温培养。转接后的试管放于30℃恒温箱中培养,菌丝 在PDA培养基上20天左右长满,其他几种培养基上长满时间为 15天左右,菌丝初期茸毛状,纤细、洁白整齐,后期菌丝浓 密乃至致密,呈半葡萄状,乳白色;八是粘贴标签。粘贴标签后,将试管低温保藏待用。